高中生物微专题-选必三知识填空-第3章 第1节 重组DNA技术的基本工具.docx

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第三章基因工程

第一节重组DNA技术的基本

1．基因工程：指按照人们的愿望，通过等技术，赋予生物新的，创造出更符合人们需要的新的。从技术操作层面看，由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫。

一、分子手术刀—限制性内切核酸酶

2．限制性内切核酸酶全称和简称

全称：???

简称：

3．限制性内切核酸酶来源：主要是从中分离纯化出来的

4．限制性内切核酸酶作用：

①能够识别DNA分子的某种。

②使链中的断开。

5．限制性内切核酸酶作用部位：

6．限制性内切核酸酶识别序列：大多数限制酶的识别序列由个核苷酸组成，也有少数限制酶的识别序列由个、个或的核苷酸组成。

7．限制性内切核酸酶切割结果：

(1)DNA分子经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式和。

(2)EcoRⅠ限制酶切割

EcoRⅠ识别序列为GAATTC

EcoRⅠ切割部位为之间的磷酸二酯键

(3)SmaⅠ限制酶切割

SmaⅠ识别序列为CCCGGG

SmaⅠ切割部位为之间的磷酸二酯键

????

二、分子缝合针—DNA连接酶

8．DNA连接酶功能：将，恢复被限制酶切开的。

9．DNA连接酶分类和对比

种类

E·coliDNA连接酶

T4DNA连接酶

来源

T4噬菌体

特点

只缝合末端

缝合末端末端

作用

恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的

10．比较与DNA有关的六种酶

名称

作用部位

作用底物

作用结果

限制酶

DNA

将DNA切成两个片段

DNA连接酶

磷酸二酯键

将两个连接为

一个DNA分子

DNA聚合酶或热

稳定DNA聚合酶

磷酸二酯键

脱氧核苷酸

将单个脱氧核苷酸依

次连接到单链末端

DNA(水解)酶

磷酸二酯键

DNA

将DNA片段水解为

解旋酶

碱基对之间的

DNA

将双链DNA分子局部解旋

为，形成两条长链

RNA聚合酶

磷酸二酯键

将单个核糖核苷酸依

次连接到单链末端

三、分子运输车——载体

1.载体作用：携带外源DNA片段进入受体细胞。

11．载体种类：的衍生物、等。

12．载体作为载体需具备的条件

①；

②；

③；

④。

探究.实践：DNA的粗提取与鉴定

1.DNA的粗提取与鉴定提取思路：利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面存在的差异，选用适当的物理或化学方法对他们进行提取。

13．DNA的粗提取与鉴定提取原理：

①DNA不溶于，但某些蛋白质溶于酒精，利用这一原理，可以初步分离DNA与蛋白质；

②DNA在中的溶解度不同，它能溶于2mol/L的NaCl溶液。

14．DNA的粗提取与鉴定鉴定原理：在一定温度下(沸水浴)，DNA遇会呈现蓝色，因此可以作为鉴定DNA的试剂。

15．比较DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同

溶解规律

2mol/LNaCl溶液

0.14mol/LNaCl溶液

DNA

16．DNA粗提取中的注意事项

(1)本实验不能用哺乳动物成熟的红细胞作实验材料，原因是无细胞核(无DNA)。可选用鸡血细胞作材料。

(2)加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔和，否则容易产生大量的泡沫。加入和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成。

(3)二苯胺试剂