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液相色谱仪检定方法和注意事项

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摘要：液相色谱仪可以实现对物质的有效分离，以此进行详细检定和分析，在食品、医药和生物等多个领域都有广泛应用。为保证检定结果的精准性，在实际检定操作中，必须采取正确的检定方法，严格按照相关标准和规定执行，控制好各项影响因素，所以极有必要深入分析其检定方法及注意事项。

关键词：液相色谱仪；检定方法；注意事项

引言：

液相色谱仪功能众多，检测精度高，在实际应用过程中能够根据实际情况进行质量分析，更能够按照预期检定目标，在相应的流程及规范之下全面分析样本物质。但为了保证检定效率，就应对相关检定方法和注意事项进行分析，依照实际缩减不必要步骤，为检定质量的提升夯实基础。

一、液相色谱仪原理

该仪器主要包含了样品加入系统、样品输送系统、样品分离系统、检定结果系统以及结果分析处理系统，在实际检定过程中，高压泵会直接将流动相压入系统中，样品溶液进入流动相中，同时在流动相运动过程中运动，直至进入色谱柱。样品溶液组成物质其性质差异较大，因此色谱柱中的运动也会有所不同，经过一段时间的运动后，其运动速度差异会变得更大，从而分成多个部分从色谱柱中流出[1]。检测器这时候就会记录下样品组分浓度，最后通过图谱的形式将其呈现出来（图1）。

图1分离方式

二、检定方法

（一）性能检定

操作人员要先详细检查仪器，无误后依照仪器功能选择检测参数。倘若其装置是紫外可见光检测器则应选择适合的灵敏度，同时把无水甲醇作为流动相，在整体基线完全处在平稳情况下时再注入相应的萘甲醇标准溶液[2]。如果使用的荧光检测器，其流动相溶液应首选100%甲醇溶液，在确定灵敏度时应放在中间档位，整体趋于平稳后再注入相应的萘甲醇标准溶液。倘若应用的是蒸发光检测器等，流动相依然不变，但要选用200浓度的胆固醇标准物质进行检验其灵敏度也要设置在中间档位。但不管应用哪种检测装备，在实际落实过程中都应读取6组数据，并将其保留时间和峰面积记录下来带入RSD公式中，最后得到结果。整个过程中应对检测的注意事项进行全面分析，而要确保整个检定过程与结果的客观性和精准性，还应确保仪器可以正常使用同时对检定结果进行科学记录。

（二）色谱柱温箱温度

实际检定时应重点对检定方法进行分析，并给温箱安装温度计，以此测量和检定色谱柱的温度。然后再重点将其温度划分为35℃和45℃两个温度数值。实际操作时应完全按照相关要求落实，记录读数时应确保温度波动程度比较小时的记录情况，用秒表记录，并未每十分钟进行一次记录，共记录7次，保证所有信息数据的详细性，最后计算出算术平均值[3]。

（三）基线噪音与漂移检定

在对不同项目进行检定时，色谱柱材料要应用专项材料，流动相为100%甲醇，流速完全依照相关标准确定，并确保仪器的灵敏度和运行状态。当整个仪器基线稳定之后，直接选择最大波峰和波谷差值作为噪声值，同时依照仪器标度以及衰减倍数对基线噪声进行测定。基线漂移值则是读取原坐标和基线间的距离数值（30min内）[4]。完成之后，环境温度、流动相以及泵压力等相关因素的变化都会导致基线和噪声出现异常，这时候应重点依照实际情况找到问题，并提出相应的解决对策，以确保最终检定结果的精准性。此外，仪器预热对于该项检定项目的影响比较大，所以实际开展前就应及时进行仪器预热，在其状态达到最佳状态的时候再开始检定。检定工作完成后应对相应的数据信息进行准确手机，并按照公式进行计算，但应特别注意数据单位换算问题，以此减少计算错误。

三、注意事项

（一）控制好柱温环境因素

在实际检定过程中，特别是在检定色谱柱柱箱温度时，基本都是应用恒温操作的方式完成，所以这就需完全依照规范和要求操作，控制好实验温度变化，避免影响恒温操作效果。温度控制区域一般不能超过3℃，倘若使用示差折光率检测器则更要控制好温度，使温度变化区域控制在2℃以内。在这之中湿度也是非常重要的问题之一，整体应控制在20%-85%之间，以避免环境因素影响过大，而使最终的检定结果出现过大差错。

（二）控制检测器波长误差因素

当前最常用的检测设备主要是紫外可见光检测器和二极管阵列检测器，如果是使用的前者，整个过程会比较繁琐，应给设备中注入紫外分光光度计溶液标准物，并在人工方式下实现波长值控制。当波长值发生改变，整体吸收数值也会受到影响，最终获得实际吸收波长值。所以目前该方式常用于老式仪器检定中，因为大多数新型仪器在检定时无法通过手动方式对波长进行调整。但有些设备具有自动回零的效果，所以在操作时应以连续进样为主，即使用空管代替色谱柱，纯水作为流动相，再渐渐改变波长，在注入体积相同的紫外分光光度计溶液标准物后得到色谱峰，最后计算出波长示值误差。这一方式实际操作使难度较大且可能会导致仪器被污染，只要出