第49讲　基因工程的基本工具和基本操作程序-2025年高考生物一轮复习练习（新人教新高考）.pdfVIP

第49讲基因工程的基本工具和基本操作程序

课标内容(1)阐明DNA重组技术的实现需要利用限制性内切核酸酶、DNA连

接酶和载体三种基本工具。(2)阐明基因工程的基本操作程序主要包括目的基因

的筛选与获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞和目的基因的检

测与鉴定等步骤。(3)DNA的粗提取与鉴定实验。(4)利用聚合酶链式反应(PCR)

扩增DNA片段并完成电泳鉴定，或运用软件进行虚拟PCR实验。

考点一重组DNA技术的基本工具

1.基因工程概述

基因工程的理论基础

2.重组DNA技术的基本工具

(1)限制性内切核酸酶(也称“限制酶”)

①将一个基因从DNA分子上切割下来需要切两处，同时产生四个黏性末端或平

末端。

②限制酶不切割自身DNA的原因是原核生物DNA分子中不存在该酶的识别序

列或识别序列已经被修饰。

(2)DNA连接酶

①DNA连接酶连接的是两个DNA片段，而DNA聚合酶是把单个的脱氧核苷酸

连接到已有的DNA片段上。②DNA聚合酶起作用时需要以一条DNA链为模板，

而DNA连接酶不需要模板。

(3)载体

【情境推理·探究】

1.实践中常用某些病毒载体作为基因工程工具，除具备普通“质粒载体”的条件

外，还应具有的条件是__________________________________________________

____________________________________________________(答出两点即可)。

提示对靶细胞具有较高的转化效率，不能增殖，对细胞无害。

2.限制性内切核酸酶EcoRⅠ只能识别序列—GAATTC—，并只能在G与A之间

切割。若在某目的基因的两侧各有1个EcoRⅠ的切点，请画出目的基因两侧被

限制酶EcoRⅠ切割后所形成的黏性末端。

提示

3.软米基因会导致水稻稻米合成直链淀粉含量降低呈现软米特征，人们大多喜欢

mq

软米的口感，为获得高产软米粳型水稻，软米基因W与蜡质基因Wx互为等

x

位基因，序列长度相同均为557碱基对(bp)，但基因内部出现了限制酶NlaⅢ识

别位点，用限制酶NlaⅢ处理不同植株的DNA片段，获得电泳图如下，分析可

知含有纯合软米基因的植株为哪几个？(填植株编号)

软米基因检测结果

提示1、4、5、9、10。

【重点难点·透析】

1.限制酶的选择原则

(1)不破坏目的基因原则：如图甲中可选择PstⅠ，而不选择SmaⅠ。

(2)保留标记基因、启动子、终止子、复制原点原则：所选择的限制酶尽量不要

破坏这些结构，如图乙中不选择SmaⅠ。

(3)确保出现相同黏性末端原则：通常选择与切割目的基因相同的限制酶切割质

粒，如图中PstⅠ；为避免目的基因和质粒自身环化和随意连接，也可使用不同

的限制酶切割目的基因和质粒，如图也可选择PstⅠ和EcoRⅠ两种限制酶。

2.标记基因的作用

标记基因可用于检测目的基因是否导入受体细胞：

考向围绕基因工程的基本工具，考查科学思维

1.(2023·江苏盐城调研)图甲、乙中的箭头表示三种限制性内切核酸酶的酶切位

R

点，Amp表示氨苄青霉素抗性基因，neo表示新霉素抗性基因。下列叙述错误

的是()

A.在构建重组质粒时，可用PstⅠ和HindⅢ切割质粒和外源DNA

B.在酶切过程中，不能破坏质粒中全部的标记基因

C.若只用PstⅠ处理质粒和外源DNA分子片段，无法避免自身环化和反向连接

D.导入重组质粒的大肠杆菌可以在含氨苄青霉素的培养基中生长

答案D

解析切割目的基因时，用BamHⅠ切割会破坏目的基因，只用PstⅠ切割目的

基因和质粒载体，会出现目的基因和质粒的自身环化，或目的基因和质粒的反向

连接，而用PstⅠ和HindⅢ进行酶切，能确保目的基因和质粒的正向连接，并且

质粒上保留新霉素抗性基因作为标记基因，A、C正确；在酶切过程中，不能破

坏质粒中全部的标记