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大鼠甲状旁腺激素(PTH)酶联免疫分析试剂盒说明书--第1页
大鼠甲状旁腺激素(PTH)酶联免疫分析试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用
预期应用
ELISA法定量测定大鼠血清、血浆或其它相关液体中甲状旁腺激素(PTH)含量。
实验原理
用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被单抗的微孔中依次加入标本或标准品、生
物素化的抗PTH抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过
氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的
PTH呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制
1.酶联板:一块(96孔)
2.标准品(冻干品):2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以
上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为1,500pg/ml,做系列倍比稀释后,分别稀释1,500
pg/ml,750pg/ml,375pg/ml,187.5pg/ml,93.75pg/ml,46.88pg/ml,23.44pg/ml,样品稀
释液直接作为标准浓度0pg/ml,临用前15分钟内配制。
如配制750pg/ml标准品:取0.5ml1,500pg/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的
Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3.样品稀释液:1×20ml/瓶。
4.检测稀释液A:1×10ml/瓶。
5.检测稀释液B:1×10ml/瓶。
6.检测溶液A:1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液A1:100稀释,稀释前根据预先计
算好的每次实验所需的总量配制(每孔100ul),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如1ul检
测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
7.检测溶液B:1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B1:100稀释。稀释方法同检测溶
大鼠甲状旁腺激素(PTH)酶联免疫分析试剂盒说明书--第1页
大鼠甲状旁腺激素(PTH)酶联免疫分析试剂盒说明书--第2页
液A。
8.底物溶液:1×10ml/瓶。
9.浓洗涤液:1×30ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10.终止液:1×10ml/瓶(2NH2SO4)。
标本的采集及保存
1.细胞培养物上清:请离心后收集上清,并将标本保存于-20℃,且应避免反复冻融。
2.血清:标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000xg离心20分钟,取上清即可检测,
或将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
3.血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2-8°C1000xg离心15
分钟,或将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
注:以上标本置4℃保存应小于1周,如需长期保存,请置-20℃密封保存,但也不应超过3
个月;标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测;高血脂的标本不需
进行特殊处理,可直接检测。
操作步骤
实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。
每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试
剂盒的检测范围。
1.加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100ul,余孔分别加标
准品或待测样品100ul,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,
轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性
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