什么是实时荧光定量PCR课件.pptVIP

放射生物与纳米毒理学仪器平台管理员：吴安庆联系方式：办公室：401#1311

放射生物及纳米毒理学仪器平台，整合了放射生物学研究中心和辐射纳米毒理学研究中心2个团队20余台大型仪器，总价值2000万元，中心仪器设备包括：透射电子显微镜、高速转盘激光共聚焦显微镜、点扫描激光共聚焦显微镜、流式细胞仪、高内涵细胞成像系统、实时荧光定量PCR仪、全功能微孔板检测仪、溶剂纯化系统、真空冷冻干燥机、凝胶渗透色谱仪、纳米粒度仪、紫外可见近红分光光度计、X射线照射仪、液体闪烁计数仪等化学、生物学、材料学、放射生物学研究设备等。本平台目标为建成面向校内外开放的、具有一流水平的放射纳米毒理学研究平台，实现对放射纳米材料的毒理评价及放射医用材料安全性评估提供重要技术支撑和检测平台。

?流式细胞仪?实时荧光定量PCR仪?其他仪器

使用原则：参加过仪器使用培训，通过网上仪器知识考试，网上提前预约，管理员审核通过方可使用。注意事项：1、上机使用前在管理员指导下开机，设程序，测样。2、样本上机前必须用孔径30微米滤网进行过滤，防止大的细胞团块堵塞机器管路。3、荧光样本需要避光。4、样本测完后剩余倒入废液桶。仪器放置地点：401-1316

1.三激光八色的光学配置：488nm、640nm、405nm三根固态激光器，实现八种荧光的检测，包括FITC、PE、PerC-Cy5.5、PE-Cy7、APC、APC-Cy7、V500、V450等大部分流式染料。2.全自动光路校准功能，无需人工调节，仪器全自动完成光路校准；光学检测单元附带电子ID芯片，自动识别光谱信息；光路自动开启和关闭功能。3.荧光检测灵敏度：FITC≤110MESF，PE≤30MESF。4.自动荧光补偿功能，使用不同类型细胞做相同实验需要改变信号放大电压时，无需重新使用单阳性样本调节补偿，仪器自动完成调节。5.具备灵活的上样方式，可以同时兼容2ml、5ml、15ml等多规格试管上样，方便实验操作。6.细胞检测能力：能将0.2μm目标颗粒与噪音信号明显区分7.数字分辨率：≥16-bit动力学范围。8.细胞获取速度：≥30000细胞/秒。

什么是流式细胞术对于处在快速直线流动状态中的细胞或颗粒进行多参数、快速定量分析和分选的高新技术。研究对象单个颗粒，如微球、外周血，骨髓，细胞穿刺液，洗脱液，实体组织，培养细胞，微生物

流式细胞仪工作原理和基本结构流式细胞仪原理?液流系统形成层流系统，聚焦细胞，让细胞逐一排队。?光学系统激发和收集光信号?电子系统将光信号转化为电信号，并使其数字化以供计算机分析

液流动系统SheathfilterLaserinterceptFlowcellLoader(platesortuberacks)Sampleinjectiontube(SIT)WastetankSheathtank

光学系统·激发光学系统:激发光源—激光光导纤维和棱镜—将激光引导到检测区域·接收光学系统:滤光片等—将产生的光信号引导到对应的光学接收器

DetectorarraysCollectionOpticsFiberoptics405nm640nm488nmCollectionlensLaserLaserLaserFSCdiodeLensFlowcellSamplecoreExcitationoptics

电子系统将光信号成比例的转换成电信号，并进行数字化处理后转入计算机l将光信号转化为电信号（模拟信号）l将模拟信号转化为数字信号l计算每个脉冲峰l和计算机连接以传出数据

光信号转换为电信号光电转换器光电二极管---FSCPhotodiodes光电倍增管---SSCFluoresence(FL1-FL4)Photomultipliertubes(PMTs)细胞经激光照射产生的荧光信号被PMT接受，形成电脉冲信号

流式细胞仪的应用临床应用=HIV免疫分型，CD4绝对计数=白血病和淋巴瘤的免疫分型=肿瘤的细胞周期和倍体分析=网织红细胞计数=细胞移植的交叉配型和免疫状态监测=干细胞计数=残量白血病细胞检查=HLA-B27检查=血小板功能及相关疾病

细胞学应用细胞功能=细胞表面/胞浆/核的特异性抗原=细胞活性=细胞内细胞因子细胞结构=细胞大小=细胞粒度=细胞表面面积=核浆比例含量与细胞周期=酶活性=DNA=激素结合位点=细胞受体=细胞凋亡=RNA含量=蛋白质含量=染色体分析

=细胞凋亡=细胞周期=以细胞为载体，以荧光为信号的实验都可以考虑用流式细胞仪检测

我们平台流式细胞仪使用情况统计

实时荧光定量PCR仪使用原则：参加过仪器使用培训，通过网上仪器知识考试，网上提前预约，管理员审核通过