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食品微生物检验技能试题及答案--第1页

食品微生物检验技能试题一

一、有两管菌种，一管为金黄葡萄球菌，一管为大肠杆菌，但标签已脱落，请通

过染色实验将其分开。（40分）

1、涂片、干燥、固定（10分）

2、染色（15分）

3、镜检（10分）

4、报告（5分）

二、酱油中细菌总数的测定（60分）

1、实验准备（20分）

2、样品稀释与培养（20分）

3、菌落计数方法（10分）

4、菌落计数的报告（10分

答案要点

一、菌种区分

1、涂片、干燥、固定

（1）取两块洁净载玻片，分别在载玻片中央滴一滴生理盐水，用无菌操作分别

挑取菌种于载玻片的水滴中，调匀涂成薄膜，直径1.5cm左右。

（2）干燥室温干燥或用电吹风吹干。

（3）固定涂片面上，在酒精灯上过火三次，使细胞质凝固，以固定细菌的形

态，并使其不易脱落。但不能在火焰上烤，否则，形态会破坏。

2、染色

（1）初染加草酸铵结晶紫染色液染色1分钟，用水冲洗。

（2）媒染滴加碘液冲去残水，并用碘液覆盖1分钟，水洗。

（3）脱色将载玻片上的水甩干净，在载玻片下衬以白色背景，滴加95%的酒

精脱色，直洗至流出的酒精刚刚不出现紫色为止（0.5分钟），立即用水冲净酒

精。

（4）复染用番红染液染1-2分钟，水洗。

3、镜检干燥后，置显微镜下观察。

4、报告球状、染成紫色者为金黄葡萄球菌，杆状、染成红色者为大肠杆菌。

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二、酱油中细菌总数的测定

1、实验准备

（1）酱油

（2）1ml与10ml吸管将吸管洗净烘干，塞入少量脱脂棉，卷好防潮纸进行干热

灭菌（160℃、2小时）或加压灭菌。（121℃、30分钟）

（3）平皿将平皿分为10个一卷，用防潮纸包好，同上述吸管一起进行灭菌。

（4）备一瓶90ml和三管9ml的生理盐水，配以松紧适度的棉塞，用防潮纸将口

部包好，同上述材料一起进行加压蒸汽灭菌，但需使灭菌后仍能保持原有毫升数

（也可应用生理盐水灭菌后直接吸取的办法）。

（5）培养基蛋白胨牛肉膏氯化钠琼脂培养基。将培养基用碱液调至PH7.2-7.4,

装入灭菌的试管中约15ml,进行加压灭菌后，保温45℃备用。

2、样品稀释与培养

（1）用10ml无菌吸管将酱油样品注入90ml无菌生理盐水内，充分摇匀，作成

1：10的稀释液。应严格无菌操作。

（2）用1ml无菌吸管，吸取1：10稀释液1ml，注入含有9ml无菌生理盐水的

试管内，振荡试管混合均匀，做成1：100的稀释液。

（3）另取1ml无菌吸管，按上项操作顺序做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，

即换用一支灭菌吸管，配成1：1000和1：10000的稀释液。

（4）再取三支1ml无菌吸管（或使用该稀释度的吸管），分别吸取1：10、1：

100和1：1000的稀释液各1ml于平皿内，每个稀释度做两个平皿。

（5）立即将15ml已冷却至45℃的培养基注入平皿内，并转动平皿，使其混合

均匀。

（6）待琼脂凝固后，用纸包好，反转平皿，置于37℃恒温箱内培养24小时后

取出，计算平皿内细菌菌落数目，成以稀释倍数，即得每毫升样品所含菌