原创力文档- 1、本文档共6页，可阅读全部内容。
- 2、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 6、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
间接ELISA法测定抗人血清白蛋白效价--第1页
间接ELISA法测定抗人血清白蛋
白效价
间接ELISA法测定抗人血清白蛋白效价--第1页
间接ELISA法测定抗人血清白蛋白效价--第2页
间接ELISA法测定抗人血清白蛋白效价
作者：ZP（成都医学院检验医学院09
级医学检验本科二班，610500）
【摘要】目的通过运用间接ELISA法，来测定抗人血清白蛋白的效价。方法用抗原、酪蛋白分别包
被、封闭微孔板，再加入待检血清、一抗、二抗，建立间接包被模式酶联免疫法。经方阵滴定确定抗
原和酶标抗体的最适浓度后，测定抗体效价。结果在包被的人ALB浓度为0.1ug/ml，二抗1：20000的
稀释倍数时，测出的抗人ALB的效价范围为1：51200。结论运用间接ELISA法，在检测抗人ALB的灵敏
度高，优化了反应条件，可用于初步抗人ALB的检测。
【关键词】间接ELISA；抗人血清白蛋白；效价；羊抗人ALB、兔抗羊IgG-HRP
间接ELISA法，是目前最常用的方法，因其灵敏度高，操作简便而被运用
广泛。此方法是测定抗体最常用的方法，属于非竞争结合试验。
其原理是将抗原连接到固相载体上，样品中待测抗体与之结合成固相抗原-
受检抗体复合物，再用酶标二抗与固相免疫复合物中的抗体结合，形成固相抗
原-受检抗体-酶标二抗复合物，测定加底物后的显色程度，确定待测抗体含量。
此次试验就是用间接ELISA测定未知的抗人ALB的效价。
1、主要试剂、仪器、材料及主要溶液的配制
1.1主要试剂：人ALB标准品（250mg/支）；一抗(羊抗人ALB，效价1:701ml/
瓶，批号：201106贮存于4～20℃，有效期：2年)；二抗(兔抗羊IgG-HRP，购
自武汉博士德生物工程有限公司)；显色剂：A液、B液，ME002可溶性TMB显
色液；终止液（2MH2SO4）；包被液：0.05MPH9.6碳酸盐缓冲液；洗涤液
0.05%TWEEN-PBS；PBS缓冲液0.1MPH7.4；封闭液1%酪蛋白-PBST.
1.2仪器：洗板机（BIO-RADMODEL1575）、孵箱（上海-恒科学仪器有限公司型
号：DHP-9272）、SM-3自动化酶免疫分析仪（北京天石医疗用品制作所）
1.3材料：96孔酶标板、一次性塑料试管、加样枪（上海求精生化试剂仪器
有限公司）
1.4主要溶液的配制：1)、0.05Mol/LPH9．6的碳酸盐缓冲液（包被稀释液）：
准确称取1.6g碳酸钠，2.9g碳酸氢钠于烧杯中加水适量使溶解，用去离子水定
溶于1L的容量瓶中，同时调节PH值至9.6；2)、PH7.4PBS缓冲液:准确称取
氯化钠8g，氯化钾0.2g，十二水和磷酸氢二钠3.58g，磷酸二氢钾0.2g于烧
杯中，用去离子水定溶于1L的容量瓶中，同时调节PH值至7.4；3)、封闭液
1%酪蛋白-PBS-T：准确称取3g酪蛋白于以洁净烧杯中，再加入300mlPBS溶液
和150ulTween20。将烧杯置于电炉上边搅拌边加热，直至酪蛋白完全溶解；
4)、洗涤液0.05%TWEEN-PBS：向1000mlPH7.4PBS缓冲液中加入500μl
Tween20。PBS-T既是洗板液也是溶解封闭剂酪蛋白（1%）的溶解试剂，配方为
PBS+Tween20.
文档评论（0）