高中生物拓展：土壤中分离以尿素为碳源的微生物 高二下学期.pptxVIP

;1、学习从土壤中分离细菌的方法。

2、练习无菌操作技能。

3、掌握微生物大分子水解试验的原理与方法。;尿素是一种重要的农业氮肥。但是，尿素并不能直接被农作物吸收。只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。

;幽门螺杆菌（Helicobacterpylori）：Hp可产生高活性的尿素酶

碳14、碳13呼气试验：碳13是稳定同位素，无任何放射性

碳14检测有微弱放射性

;菌落是指单个或少数细胞在固体培养基上大量生长繁殖时，所形成的肉眼可见的具有一定形态结构的子细胞群体。不同微生物形成的菌落具有不同的特征，是鉴定菌种的重要依据。

;培养基：是指人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。

用途：培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。

组成：碳源、氮源、无机盐、生长因子、水

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配方：

LB培养基：蛋白胨1g,酵母提取物0.5g,氯化钠1g,

pH7.4-7.6，蒸馏水100mL（固体培养基加琼脂粉2g）

尿素培养基：葡萄糖1g,氯化钠5g,磷酸氢二钾5g,

酚红10mg琼脂糖20g,脲80g总体积1000mL

;;;;;;1.土壤取样

2.制备培养基

3.倒平板

4.样品稀释

5.微生物培养与观察

6.鉴定

;1.土壤取样;尿素：20%，过滤除菌;（1）将LB培养基熔化后冷却到50℃左右倒平板。

（2）将尿素培养基熔化后冷却到50℃左右，加入过滤除菌后的尿素溶液，混匀，倒平板。

;;;用无菌吸管分别吸取相应稀释液各0.1mL，对号放入已写好稀释度的平板中，用无菌涂棒在培养基表面轻轻地涂布均匀，室温下静置5~10min，使菌液吸附进培养基。

;培养：倒置于37℃培养箱中培养，LB培养基培养1天，尿素培养基培养4天。

观察与计数：取出后观察，观察尿素培养基平板与LB培养基平板上的菌落数及颜色变化，选择菌落数在30~300之间，取平均值，进行计数。

;10-2，培养3天;;

分别数出2个稀释度下的菌落数（单位：CFU）。

CFU：colonyformingunit

活菌数(个/ml)=[(x1+x2)/2]×10×稀释倍数

菌落数30—300个为有效;菌落特征描写方法