生物催化剂的来源与筛选.pptVIP

第三章生物催化剂的来源与筛选大纲3.1概述3.2微生物酶筛选的策略3.3微生物和酶的一般筛选方法3.4优良菌种选育3.5从环境中微生物基因组DNA筛选酶的方法3.1概述3．1．1生物催化剂的概念1生物催化剂:是生物反应过程中起催化作用的游离或固定化酶的总称。2分类结构形式细胞酶多细胞生物体游离型催化剂固定化催化剂3.1.2生物催化剂来源与多样性3.1.3生物催化剂的寻找和发现提高筛选效率的基本原则①需要设计合适的用酶方法,使得目标反应非常清楚②需要在有希望的微生物中寻找具有合适活性的微生物③需要建立方便和敏感的分析系统尽可能多的搜寻微生物3.2微生物酶筛选的策略3.2.1常规生物催化剂筛选的一般策略设计反应过程选择合适的酶或产酶微生物建立有效且方便的分析方法生物催化剂筛选的反应过程的设计图3-1海因酶和N-氨基甲酰氨基酸水解酶两步选择性水解制备D-对羟基苯基甘氨酸生物催化剂筛选的反应过程的设计例:①生物法:腈水合酶与酰胺酶催化反应生产丙烯酰胺CH2＝CH－COOHCH2＝CH－CN腈水合酶H2OCH2＝CH－CONH2H2O酰胺酶②传统法:铜催化丙烯腈的水合生产丙烯酰胺除去O2丙烯腈水水合作用浓缩除去Cu离子，脱色丙烯酰胺产物催化剂的回收制备催化剂的分离未反应的丙烯腈酶或产酶微生物的筛选一般产酶微生物筛选的原则①能够通过发酵在相对较短的时间内高产目标酶；②微生物应该尽可能地利用便宜和方便的原料生产酶；③微生物所产生的酶最好有比较高的专一性④所采用的微生物应该是不产生有害物质的非致病性的安全微生物⑤微生物的遗传稳定性应该比较高生物催化剂筛选的主要途径（1）从商品酶库中筛选（2）从已知菌种来源和菌种保藏中心筛选生物催化剂（3）从自然界发现和筛选产酶微生物（4）从基因库筛选3.2.2从极端微生物中筛选极端酶的策略极端酶（extremozyme）是由极端微生物（extremophile）产生的酶,与之相对应的中间型是常态微生物（mesophilicorganism）产生的酶。如何进行极端酶的研究和开发①必须有足够的酶,这就涉及极端微生物的培养②依赖极端酶在中间宿主中的表达表3-1某些有应用前景的超级嗜高温酶酶功能酶活力的最适温度/℃葡萄糖异构酶葡萄糖→果糖，生产高果糖糖浆95木聚糖酶木浆和纸生产中水解木聚糖105α-淀粉酶淀粉水解85~90纤维二糖水解酶纤维素水解105β-葡聚糖酶A，β-葡聚糖酶B纤维素水解95β-甘露聚糖酶甘露聚糖水解92α-半乳糖苷酶半乳甘露聚糖水解100~105β-葡萄糖苷酶纤维二糖水解105β-木糖苷酶木二糖水解未定β-半乳糖苷酶乳糖水解803.2.3未培养生物催化剂的发现策略未培养微生物（unculturedmicroorganism）美国微生物学家Colwell的实验室在1982年首先提出“不能培养微生物（nonculturablemicroorganism）”的概念,他们发现快速生长的霍乱弧菌和大肠杆菌移植到无营养料的盐水中,经长时期的低温保存后,细胞数不减,代谢活力不变,但在正常肉汤培养条件下不产生菌落,因此他们用“活的但不能培养（viablebutnonculturable,VBNC)”一语描述这种潜伏状态的细菌。3.3微生物和酶的一般筛选方法3．3．1从自然界发现产酶微生物采样富集培养:是根据微生物的生理特点，在目的微生物含量较少时，设计一种选择型培养基，创造有利的生长条件，是目的微生物在最适的环境下迅速地生长繁殖，数量增加，由原来自然条件下的劣种变成人工环境下的优势种。分为分批式（摇瓶培养）和恒化式（连续培养）两种不同的方式。分离筛选图3-2从自然界发现产酶微生物的方法3.3.2生物催化剂的高效筛选高通量筛选（high-throughscreening,HTS）是近年来发展起来的一种新型筛选技术,其特点是微量、快速、灵敏、准确,在短时间内可以检测大量的微生物。3.4优良菌种选育优良生产菌种应该具备的基本特点:①生产菌种应该具备在较短的发酵周期内产生大量发酵物②在发酵过程中不产生或少产生与目标产品性质相近的反应产物或副产物，以便于分离纯化。③能利用多种来源的