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“植物组织培养”的教学组织
人民教育出版社课程教材研究所吴成军
在《生物技术实践》模块课程标准中,植物组织培养的具体要求是“尝试植物的组织培
养”。尝试是技能性目标中的模仿水平,即学生仿照教师的示范性动作完成对实验对象的操
作。
植物组织培养是一项操作复杂而精细,操作难度较大的实践活动,其操作流程包括:配
制母液、培养基配制与灭菌、外植体选择和消毒、接种、形成愈伤组织、诱导丛芽和生根、
组培苗移栽等操作环节。从操作的持续时间看,完成前四项活动需要一天,后三项活动需要
1~2个月。为了确保在有限的时间内顺利地开展实验教学,需要确定学生动手操作的一些
重要环节和步骤,并针对这些环节和步骤提前做好实验准备。
1实验室的准备工作
本实验需要作好三项实验准备:一是提前配制各种母液;二是提前准备MS培养基;
三是选择外植体并进行预处理。
1.1配制母液
母液中含有大量元素、微量元素、激素(植物生物调节剂)和维生素等有机成分,母
液浓度是实际溶液浓度的5~10倍。配制母液花费时间多,需要用到溶量瓶、移液管等精密
仪器,无法由每位学生亲自操作,教师可带领部分学生在课外进行。母液的类型和配制顺序
如下:
配制母液的注意事项:⑴自来水或河水中含有大量的矿质元素,勿用配制母液;⑵配制大量
元素和微量元素母液时,应将每种化合物单独溶解后,再一一混合,同时还应用适量的蒸馏
水清洗烧杯内壁,并将清洗后的蒸馏水倒入混合溶液中,这样可以保证每种元素的浓度,混
合时要按照教材附表中的顺序进行,最后加入的是氯化钙溶液,这样可以避免发生沉淀;⑶
配制好的母液要先倒入1000ml烧杯中,再由烧杯转入1000ml细口瓶中,不可由容量瓶
直接倒入细口瓶中;⑷注意观察母液中是否有絮状物,出现絮状物表明离子之间发生反应,
需要重新配制母液;⑸植物生长调节剂难溶于水,需要碱或酸助溶,一般生长素类物质用碱
(0.1mol/LNaOH1~3ml)或酒精(75~95%的酒精1~3ml)助溶,细胞分裂素类物质一
般用酸(0.1mol/LHCL1~3ml)助溶,加入蒸馏水定溶时要缓慢,也可用水浴法助溶;⑹
用棕色细口瓶盛装有机物母液和植物生长调节剂母液,避免透射光损害母液中的有机成分;
⑺在瓶壁上贴好各种母液的标签(下图所示);⑻将配制好的母液放入冰箱中或阴凉处保
存。
MS是穆拉希吉(Murashige)和斯库克(Skoog)两位科学家第一个字母的缩写,他们于1962
年为培养烟草而设计了一种培养基,这就是组培使用中最为广泛的MS培养基;标签中间一
行的数字及单位表示的意义如下,例如,100ml/L,即配制1升培养基只需从母液中提取100ml
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即可;50mg/100ml,表明100ml母液中含有50mg萘乙酸,如取4mg的萘乙酸,只需提取8ml
母液。
除母液需提前配制好外,消毒液也需要提前配制好。外植体消毒一般采用
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