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生物医药基地westernblot技术手册

1.westernblot主要试剂的配方

1.15义电泳缓冲液配方(IL)

Tris-Base15.1g

甘氨酸(Glycine)94g

SDS5g

留意事项：

a.加时应尽量避开气泡的产生，否则会造成过多SDS的损耗。

b.配制好的溶液放于4度冰箱保存，使用时用纯稀释至IX使用。

1.2IX转膜液配方［1L)

甘氨酸(Glycine)2.9g

Tris-Base5.g

SDS0.37g

甲醇200ml

留意事项：

a.参加适量的纯，用磁力转子将各组分溶解后参加甲醇溶液，最终

用纯定容至1L(甲醇气味大，通风厨内配制，并留意戴口罩)。

b.加时应尽量避开气泡的产生，否则会造成过多SDS的损耗。

1.310XTBS配方UL)

Tris-Base24.2g

NaCl0g

留意事项：

参加适量的纯溶解各组分后，使用浓盐酸或浓氢氧化钠溶液调整

溶液的PH至7.6(一般溶解后溶液是偏碱的，所以选用浓盐酸调整

PH至7.6即可)。

b.使用PH计调整溶液的PH前，要依据说明书校准PH计。

c.PH调整至7.6后，用纯定容至1L,使用时稀释10倍至1义使用。

d.配制TBST时，在1XTBS中依据1:1000的比例参加吐温20充分

混匀即可。

1.430%丙烯酰胺单体储存液配方(100ml)

丙烯酰胺(Acrylamide)29g

N,N、・亚甲双丙烯酰胺

(N,N-MethyleneBisacrylamide)1g

留意事项:

a.将各组分溶于总体积为60ml的纯中，加热至37C完全溶解，用

纯定容至100ml。

b.用装0.45|im膜的滤器过滤，置于棕色瓶中保存于4℃冰箱保存。

c.丙烯酰胺有神经毒性，操作时戴手套，并留意不要造成试验台面

等的污染。

1.5上液(IMTris-HClPH=6.)配方(50ml)

Tris-Base6.057g

三蒸40ml

留意事项：用浓盐酸调整PH至6.,再用三蒸定容至50ml,4℃冰

箱保存。

1.6下液fIMTris-HCl,pH.)[50ml)

Tris-Base9.08g

三蒸40