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核酸提取及常见问题分析

主讲人：刘召华

北京天为时代科技主办

南京天为生物科技协办

24小时效劳热线：025－

内容

第一局部：DNA提取方法简介

第二局部：DNA提取常见问题、

原因分析及其对策

第三局部：RNA提取方法简介

第四局部：RNA提取及其RT-PCR常见

问题、原因分析及其对策

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前言

前言

核酸是遗传信息的载体，是最重要的

生物信息分子，是分子生物学研究的主要

对象，因此核酸的提取是分子生物学实验

技术中最重要、最根本的操作。

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第一局部：第一局部：DNADNA提取方法简介提取方法简介

第二局部：DNA提取常见问题、

原因分析及其对策

第三局部：RNA提取方法简介

第四局部：RNA提取及其RT-PCR常见

问题、原因分析及其对策

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DNA提取的几种方法

DNA提取的几种方法

q基因组DNA的提取

ØCTAB法

ØSDS法

Ø其它

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DNA提取的几种方法

DNA提取的几种方法

q非基因组DNA的提取

Ø质粒DNA的提取

•碱裂解法

•煮沸法

Ø线粒体、叶绿体DNA的提取

•差速离心结合SDS裂解法

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基因组DNA－CTAB法

基因组DNA－CTAB法

qCTAB法原理〔植物DNA提取经典

方法〕

ØCTAB〔hexadecyltrimethylammoniumbromide，十六烷基三甲基

溴化铵〕，是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，并与核酸形成复合

物。

Ø该复合物在高盐溶液中〔0.7mol/LNaCl〕是可溶的，通过有机溶剂

抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后参加乙醇沉淀即可使核酸别离

出来。

注：CTAB溶液在低于15℃时会形成沉淀析出，因此在将其参加冰冷的

植物材料之前必须预热，且离心时温度不要低于15℃。

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基因组DNA－CTAB法

基因组DNA－CTAB法

qCTAB提取缓冲液的经典配方

Tris-HClEDTA

组份NaClCTABβ-巯基乙醇

（pH8.0）（pH8.0）

0.1%（V/V）

终浓度100mM20mM1.4M2%(W/V)

使用前加入

ØTris-HCl〔pH8.0〕提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏；

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