凝胶类产品检验前处理技术规范.docx

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凝胶类产品检验前处理技术规范

范围

本文件规定了凝胶类产品检验前的处理办法。

本文件适用于不同类型的凝胶类产品，包括水溶性凝胶、油溶性凝胶、混悬型凝胶和乳胶型凝胶等，进行相关检测和试验前的处理过程。

规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

中华人民共和国药典《2020年版》四部

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

酸沉acidprecipitation

酸沉法是利用某些成分在酸中沉淀的性质而达到分离的方法。

3.2

盐析saltingout

盐析（saltingout）是指在蛋白质水溶液中加入中性盐，随着盐浓度增大而使蛋白质沉淀出来的现象。

3.3

萃取extraction

萃取，又称溶剂萃取或液液萃取，亦称抽提，是利用系统中组分在溶剂中有不同的溶解度来分离混合物的方法。

基本要求

4.1基本流程

凝胶剂前处理基本流程示意图参见图1。

注：凝胶剂前处理方法选择可根据实际检测项目进行组合调整，具体组合调整方式举例见附录A。

4.2仪器设备

超声波清洗器、通风橱、分液漏斗、低温冷冻离心机、超滤管、真空干燥箱、旋转蒸发仪等。

强酸沉淀法

5.1概述

为解决卡波姆体系凝胶剂黏度大的问题，同时沉淀收集蛋白类核心成分，需对凝胶剂进行强酸沉淀处理。

5.2处理方法

10%三氯乙酸处理

取待检测凝胶剂适量，加入10%三氯乙酸溶液后，超声5min，将超声后的凝胶/三氯乙酸混合体系在6000～12000r/min下低温离心10min，取离心后沉淀物，用于后续检测。

6%高氯酸处理

取待检测凝胶剂适量，加入6%高氯酸溶液后，超声5min，将超声后的凝胶/高氯酸混合体系在6000～12000r/min下低温离心10min，取离心后沉淀，用于后续检测。

5%偏磷酸处理

取待检测凝胶剂适量，加入5%偏磷酸溶液后，超声5min，将超声后的凝胶/偏磷酸混合体系在6000～12000r/min下低温离心10min，取离心后沉淀，用于后续检测。

5.3注意事项

考虑到强酸沉淀过程中所使用的强酸试剂具有高腐蚀性和强刺激性，因此实验人员应做好防护，实验过程需在通风橱中进行。

盐析超滤法

6.1概述

为解决凝胶体系中核心成分的含量检测问题，需对凝胶剂进行盐析超滤处理。

6.2硫酸铵盐析法

取待检测凝胶剂适量，加入质量浓度为50%～70%的硫酸铵溶液，搅拌，搅拌结束后利用PBS缓冲溶液透析。

6.3超滤法

将透析后的样品利用不同孔径的超滤膜进行超滤，分别收取截留液和超滤液待用。

6.4注意事项

依据待检测成分的分子量大小，选择截留液或超滤液进行浓缩后处理。

有机溶剂萃取法

7.1概述

为解决油溶性凝胶剂（如硅酮体系）中核心成分不溶于水的问题，需对凝胶剂进行有机溶剂萃取处理。

7.2有机溶剂萃取

取待检测凝胶剂，加入适量有机溶剂（如甲苯、乙酸乙酯、乙醚等），采用分液漏斗萃取，静置，收集有机相。

7.3有机溶剂去除

收集后的有机溶剂采用旋转蒸发（如甲苯）、真空干燥（如乙酸乙酯）或冷冻干燥（如乙醚等低沸点溶剂）等方法去除溶剂，收集去除溶剂后的样品待测。

7.4注意事项

需根据所需萃取的油性物质特性，选择有机溶剂；甲苯、乙醚等有机溶剂具有一定毒性，实验全程需在通风橱内进行。

附录A（资料性）

前处理组合调整方式举例

在实际凝胶剂检测前处理过程中，通常单一的前处理方式无法满足产品多技术要求的检测，因此需要将本技术规范中所呈现的前处理方式进行调整组合。

本附录以有机溶剂萃取法、强酸沉淀法、超滤法组合为例，呈现凝胶剂前处理组合方案，组合方案流程图如图A.1所示。

图A.1有机溶剂萃取法、强酸沉淀法、超滤法组合方案流程图

具体前处理组合过程为：

（1）将待测凝胶剂与所选择的有机溶剂混合，利用萃取装置萃取，静置。

（2）取萃取后的有机相，通过旋转蒸发除去有机溶剂，收集样品用于后续检测。

（3）取萃取后的水相，加入10%三氯乙酸或6%高氯酸处理，收集沉淀物。

（4）将强酸沉淀后收集的沉淀物用适量水复溶，选择合适孔径的超滤膜超滤，收集截留液，用于后续检测。

本组合方案的分离装置图如图A.2所示。

图A.2有机溶剂萃取、强酸沉淀、超滤组合分离装置图

本附录以硅酮体系卡波姆凝胶（含胶原蛋白）前处理为例，结合图A.2分离装置流程图，详细介绍硅酮体系卡波姆凝胶（含胶原蛋白）的前处理过程，具体前处理过程如下：

（1）将硅酮体系卡波姆凝胶加入萃取装置，并加入凝胶剂5～10倍质量的甲苯，以60～100r/min的转速搅拌5m