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第三章基因工程
第一节重组DNA技术的基本工具
基因工程：指按照人们的愿望，通过转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符
合人们需要的新的生物类型和生物制品。从技术操作层面看，由于基因工程是在DNA分
子水平上进行设计和施工的，因此又叫重组DNA技术。
一、分子手术刀—限制性内切核酸酶
1.全称和简称
全称：_限制性内切核酸酶_
简称：__限制酶_
2.来源：主要是从_原核生物__中分离纯化出来的
3.作用：
①能够识别_双链_DNA分子的某种_特定核苷酸序列。
①使_每一条_链中_特定部位_的_磷酸二酯键__断开。
4.作用部位：_磷酸二酯键__
5.识别序列：大多数限制酶的识别序列由_6_个核苷酸组成，也有少数限制酶的识别序列由
_4_个、_8_个或__其他数量_的核苷酸组成。
6.切割结果：DNA分子经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式__黏性末端_和
__平末端__。
（1）EcoR①限制酶切割
EcoR①识别序列为GAATTC
EcoR①切割部位为GA之间的磷酸二酯键
（2）Sma①限制酶切割
Sma①识别序列为CCCGGG
Sma①切割部位为CG之间的磷酸二酯键
二、分子缝合针—DNA连接酶
1.功能：将__两个DNA片段连接起来_，恢复被限制酶切开的_磷酸二酯键__。
2.分类和对比
种类E·coliDNA连接酶TDNA连接酶
4
来源大肠杆菌T噬菌体
4
特点只缝合黏性末端缝合黏性末端平末端
作用恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键
3．比较与DNA有关的六种酶
名称作用部位作用底物作用结果
限制酶磷酸二酯键DNA将DNA切成两个片段
DNA连接酶磷酸二酯键DNA片段将两个DNA片段连接为一个DNA分子
DNA聚合酶或热
磷酸二酯键脱氧核苷酸将单个脱氧核苷酸依次连接到单链末端
稳定DNA聚合酶
DNA(水解)酶磷酸二酯键DNA将DNA片段水解为单个脱氧核苷酸
解旋酶碱基对之间的氢键DNA将双链DNA分子局部解旋为单链，形成两条长链
RNA聚合酶磷酸二酯键核糖核苷酸将单个核糖核苷酸依次连接到单链末端
三、分子运输车——载体
1.作用：携带外源DNA片段进入受体细胞。
2.种类：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒等。
3.作为载体需具备的条件
①_有一个至多个限制酶切割位点，供外源DNA片段（基因）插入其中__；
②_能在细胞中进行自我复制或整合到受体DNA上，随受体DNA同步复制_；
③_常有特殊的标记基因，便于重组DNA分子的筛选_；
④_对受体细胞无害_。
探究.实践：DNA的粗提取与鉴定
1.提取思路：利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化
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