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第2章细胞生物学研究方法

本章主要内容

•细胞形态结构的观察方法

•细胞及其组分的分析方法

•细胞培养与细胞工程

•模式生物与功能基因组的研究

第一节细胞形态结构的观察方法

直径分辨率

•病毒20-200nm•肉眼0.2mm

•支原体0.1-0.3µm•光学显微镜0.2µm

•细菌0.5-5.0µm•电子显微镜0.2nm

•动植物细胞20-30µm•扫描隧道显微镜

•活细胞多是无色透明的•样品制备技术

一、光学显微镜(lightmicroscope)

•从细胞的发现、细胞学

说的建立，直至今天光

学显微镜仍然是细胞生

物学研究的重要工具

1.目镜2.准焦螺旋

3.物镜4.载物台

5.反光镜

（一）普通复式光学显微镜——组成

•由3部分组成：

–光学放大系统（目镜

与物镜）

–照明系统（光源和

聚光镜）

–镜架及调节系统

（一）普通复式光学显微镜——成像

•放大的倒立虚像

–经物镜形成倒立实像

–经目镜进一步放大成虚

像

（一）普通复式光学显微镜——分辨率

•分辨率：显微镜最重要的性能参数

•分辨率是指能区分开两个质点间的最小距离

•普通光学显微镜最大分辨率0.2µm

介质空气水香柏油α溴萘

折射率11.331.5151.66

（一）普通复式光学显微镜——样品制备

石蜡切片H.E染色

Figure9-10,11aMolecularBiologyoftheCell(©GarlandScience2008)

（二）相差显微镜和微分干涉显微镜

•利用光线干涉的原理，将

相位差转换成振幅差，实

现对非染色活细胞的观察

–A.当两束光的相位相同时，

相互干涉的结果使光波的振

幅增加

–B.当两束光的相位相反时，

则导致光波的振幅降低

（二）相差显微镜和微分干涉显微镜

•相差显微镜是在普通光学显微镜的基础上，

添加“环状光阑”和“相差板”，将光程

差或相位差，转换成振幅差

体外培养MDCK细胞在普通（明视场）光学显微镜（A）

和相差显微镜（B）下拍摄图像效果的比较

（二）相差显微镜和微分干涉显微镜

•微分干涉显微镜以平面偏

振光为光源，使样品中厚

度上的微小区别转化成明

暗区别

–分辨率比普通光镜提高了一

个数量级

–录像增差显微镜可以用来直

接观察颗粒物质沿着微管运

输的动态过程Figure9-9MolecularBiologyoftheCell(©GarlandScience2008)

原理

特制棱镜将偏振光分解为相互垂直，强度相等的光束。

光束在极近的两点上通过被检物体，从而在相位上略有差别，

使图象呈现出立体三维感觉。

特点

被检物体产生三维立体感觉；与荧光观察配合更好。

缺点：需要光强高；镜检灵敏度有方向性，调节较复杂。

应用：无色透明活体标本；无色

荧光标本；染色标本；显微操作等.