DB14∕T 1510-2017 玉米镰孢穗腐病抗性鉴定牙签接种技术规程.docx

ICS65.020.20B05

DB14

山西省地方标准

DB14/T1510—2017

玉米镰孢穗腐病抗性鉴定牙签接种技术规程

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2017-12-10发布2018-02-10实施

山西省质量技术监督局发布

DB14/T1510—2017

I

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4菌种分离 2

5菌种繁殖 2

6接种 3

7田间管理 3

8病情调查 3

9抗性评价 4

附录A（资料性附录）玉米镰孢穗腐病病原 5

附录B（资料性附录）玉米镰孢穗腐病相关病菌的分子检测 7

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II

前言

本标准根据GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由山西农业大学提出并归口。

本标准起草单位：山西农业大学农学院。

本标准主要起草人：张作刚、王建明、李新凤、高俊明、胡春艳、曹挥、王春伟、王燕。

DB14/T1510—2017

1

玉米镰孢穗腐病抗性鉴定牙签接种技术规程

1范围

本标准规定了玉米镰孢穗腐病抗性鉴定牙签接种的菌种分离、菌种繁殖、接种、田间管理、病情调查及抗性评价。

本标准适用于栽培玉米（ZeamaysL.）自交系、杂交种、群体、开放授粉品种以及野生玉米和玉米近缘种对玉米镰孢穗腐病抗性的田间鉴定和评价。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

NY/T1248.8玉米抗病虫性鉴定技术规范第8部分：镰孢穗腐病。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

镰孢穗腐病

由串珠镰孢（Fusariumverticillioides）、禾谷镰孢（Fusariumgraminearum）等镰孢菌侵染而引起的玉米雌穗部分或全部籽粒及穗轴腐烂的病害。

3.2

带菌牙签

上面长有接种用菌种的牙签。3.3

牙签接种

将带菌牙签接种于植物适宜的部位。3.4

级别

定量植物个体或群体发病程度的数值化描述。3.5

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2

抗性评价

根据采用的技术标准判别植物寄主对特定病虫害反应程度和抵抗水平的描述。

4菌种分离

4.1分离

以常规组织分离法从发病玉米籽粒中分离穗腐病致病镰孢菌。分离物经形态学鉴定确认为镰孢菌(Fusariumsp.)后，进行分离物的单孢纯化。

4.2致病性测定

通过玉米穗部接种或幼苗根系接种明确分离物致病性。将发病的组织再分离培养，分离物再通过形态学方法，必要时结合现代分子生物学技术确定其种类。

5菌种繁殖

5.1菌种准备

无菌条件下将病原镰孢菌接种在直径9cm培养皿中的PDA平板培养基上，25℃恒温培养7~8d，菌种长满平板后冷藏待用。

5.2麦粒准备

将100g麦粒放300mL三角瓶中，清水浸泡12h~24h，中间冲洗1~2次，待麦粒吸足水后，再用清水冲洗2~3次，然后篦去三角瓶中的水，盖上棉塞，待灭菌。

5.3牙签准备

5.3.1洗煮牙签

将牙签在清水中浸泡12h~24h，用清水冲洗后在锅中用清水煮10min~15min，倒掉煮水后再用清水冲洗2~3次。

5.3.2渗入营养

将清水洗煮过的牙签放在锅中，加清水浸过牙签，然后每1000mL清水再加入200g去皮马铃薯小块和15g~20g葡萄糖制成营养液，一起煮20min~30min。

5.3.3沾拌面粉

将营养液中煮过的牙签捞出，趁牙签表面湿润时随即放入加有1%琼脂粉的小麦面粉中，搅拌使牙签表面均匀地沾满面粉。每800~1000根牙签需用小麦面粉30g~50g。

5.3.4牙签装袋

将沾满面粉的牙签轻放在菌袋中，使牙签之间保持一定的空隙，装满后扎住菌袋口，做成牙签菌袋。每袋装800~1000根牙签。

5.4高压灭菌

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3

将牙签菌袋与准备的麦粒高压蒸汽灭菌20min。

5.5麦粒拌菌

无菌条件下，先用接种针或接种环将所准备菌种的菌丝体和培养基一起划碎，再将其接入灭菌的麦粒中，摇动三角瓶使菌种与麦粒混均，做成带菌麦粒。100g麦粒接一