实验四-蛋白质的性质实验(一)课件.pptVIP

实验四蛋白质的性

质实验(一)

Ⅰ．蛋白质及氨基酸的

呈色反应

一、目的：

v1．了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式。

v2．了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。

v3．学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。

二、呈色反应：

v（一）双缩脲反应

v1．原理：

v尿素加热至180℃左右，生成双缩脲并放出一分

子氨。双缩脲在碱性环境中能与Cu2+结合生成紫

红色化合物，此反应称为双缩脲反应。蛋白质分

子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此

反应。可用于蛋白质的定性或定量测定。

双缩脲反应不仅为含有两个以上肽键的物质所有。

含有一个肽键和一个—CS—NH2，—CH2—

NH2，—CRH—NH2，—CH2—NH2—CHNH2—

CH2OH或—CHOHCH2NH2等基团

NH2NH2

以及乙二酰二胺（O＝C——C＝O）等物质也有

2+

此反应。NH3也干扰此反应，因为NH3与Cu可生

2+

成暗蓝色的络离子Cu（NH3）4。因此，一切蛋

白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但有双

缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。

2．试剂：

v①尿素

v②10%氢氧化钠溶液

v③1%硫酸铜溶液

v④2%卵清蛋白溶液

．操作：

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v取少量尿素结晶，放在干燥试管中。用微火加热使

尿素熔化。熔化的尿素开始硬化时，停止加热，尿

素放出氨，形成双缩脲。冷后，加10%氢氧化钠溶

液约1ml，振荡混匀，再加1%硫酸铜溶液1滴，再

振荡。观察出现的粉红颜色。要避免添加过量硫酸

铜，否则，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。

v向另一试管加卵清蛋白溶液约1ml和10%氢氧化钠

溶液约2ml，摇匀，再加1%硫酸铜溶液2滴，随加

随摇。观察紫玫瑰色的出现。

（二）茚三酮反应

v1．原理

v除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有

α—氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物

质。

vβ—丙氨酸、氨和许多一级胺都呈阳性反应。尿素、马尿

酸、二酮吡唪和肽键上的亚氨基不呈现此反应。因此，虽

然蛋白质和氨基酸均有茚三酮反应，但能与茚三酮呈阳性

反应的不一定就是蛋白质或氨基酸。在定性、定量测定中，

应严防干扰物存在。

v该反应十分灵敏，1∶1500000浓度的氨基酸水溶液即能

给出反应，是一种常用的氨基酸定量测定方法。

v茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2、

NH3和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是

所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合

生成有色物质。

2．试剂：

v①蛋白质溶液

v2%卵清蛋白或新鲜鸡蛋清溶液（蛋清∶水

=1∶9）

v②0.5%甘氨酸溶液

v③0.1%茚三酮水溶液

v④0.1%茚三酮-乙醇溶液

（三）黄色反应

v1．原理：

v含有苯环结构的氨基酸，如酪氨酸和色氨酸，

遇硝酸后，可被硝化成黄色物质，该化合物

在碱性溶液中进一步形成橙黄色的硝醌酸钠。

反应式如下：

2．试剂：

v①鸡蛋清溶液

v将新鲜鸡蛋的蛋清与水按1∶20混匀，然后用6层

纱布过滤。

v③头发

v④指甲

v⑤0.5%苯酚溶液

v⑥浓硝酸

v⑦0.3%色氨酸溶液

v⑧0.3%酪氨酸溶液

v⑨10%氢氧化钠溶液

3．v向操7作个试：管中分别按下表加入试剂，观察各管出现的现

象，有的试管反应慢可略放置或用微火加热。待各管出

现黄色后，于室温下逐滴加入10%氢氧化钠溶液至碱性，

观察颜色变化。

管号1234567

鸡蛋大豆0.3%0.3%

材料清提取指甲头发0.5%色氨酪氨

苯酚

（滴）溶液液少许少许酸酸

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