基因工程甜蛋白.pdfVIP

基因工程甜蛋白人工设计并合成了monellin甜蛋白基因，并在大肠杆菌中表达，经测定其甜度是一样

重量蔗糖的1100倍，且甜味纯粹。经诱导表达，别离纯化得到的[Asn66]monellin甜蛋白，其甜

度是一样重量蔗糖的4500倍。为提高甜蛋白的表达效率，研究了培养基、菌龄等8种因素对甜蛋

白表达的影响，确定了发酵条件的优化方案，使甜蛋白的产量由原来的70μg/ml提高到了

240μg/ml，表达效率占菌体可溶性蛋白由25%提高到40%。该工程2000年通过了专家鉴定，为

甜蛋白monellin的规模开发和应用提供了优良的基因工程菌株和发酵工艺数据。其关键技术编码“

甜蛋白的合成DNA序列及生产该蛋白质的方法〞和编码高甜度莫奈灵的基因及其产物蛋白的利“

用〞于2001年1月获国家创造专利2项〔专利号分别为Z7和Z3〕。有

关技术已转让给山西省大同市同风肉制品厂，甜蛋白进入中试。

转基因抗青枯病马铃薯设计合成了新抗菌肽基因，构建了一批单价及双价抗菌肽基因的植物表达载体，

并导入马铃薯，获得218个转基因马铃薯株系，其中185个株系中有抗菌肽基因的表达。在温室及

田间人工病圃对转基因马铃薯进展青枯病抗性鉴定，获得中抗水平的株系8个，抗性比起始品种提

高1～2级。在四川省对34个转基因马铃薯株系进展农艺性状筛选，有些株系已接近起始品种米

拉。完成了转基因马铃薯田间释放的平安性评价工作，农业部已经批准转基因抗青枯病马铃薯在四

川省进展环境释放，抗病株系累计试种约120亩。“马铃薯抗菌肽基因工程技术体系的建立及抗青

枯病新株系的获得〞工程成果在继1996年获农业部科技进步一等奖后，1997年又获国家技术创造

三等奖。“抗菌肽及其生产方法和应用〞

乳糖酶基因的克隆、高效表达及其在乳品工业上的应用筛选到一株产乳糖酶的亮白曲霉(Aspergillus

cnadidus),将其乳糖酶基因克隆并通过测序，得到该基因的基因组DNA和cDNA序列。在毕赤酵母

中高效表达乳糖酶基因，在5L发酵罐水平乳糖酶的表达量可达6g/L,酶活为3600U/mL。将该乳糖

酶纯化，与商业化应用的来源于A.oryzae的乳糖酶进展了酶学性质的比拟。结果明确，该乳糖酶在

比活、金属离子稳定性、热稳定性、Km等方面均优于A.oryzae的乳糖酶，是一个更具有生产应用

前景的新基因。乳糖酶水解实验明确在不同的温度区间，该酶均能有效地水解牛奶中的乳糖。该成

果已通过专家鉴定。“乳糖酶基因的克隆、高效表达及其在乳品工业上的应用〞

草甘膦极端污染环境微生物资源利用从极端污染环境中别离了草甘膦高度耐受和高水平降解菌株30余

株，克隆了新型草甘膦抗性EPSPS编码基因3个，具有如下特性：1〕草甘膦抗性表现突出，比已

见报道的EPSPS基因都高；2〕结构新颖，在核酸水平上与的EPSP合成酶基因没有任何同源性，

新基因中没有出现受专利保护的任何EPSPS抗草甘膦氨基酸保守序列；3〕功能明确，可以对大肠

杆菌EPSPS编码基因突变株进展功能互补，具有完整的5-烯醇丙酮酸莽草酸-3-磷酸合酶活性。新

型EPSP合成酶基因的高抗草甘膦特性在模式植物烟草中得到验证，转基因烟草在高于田间工作浓

度3倍的5%草甘膦铵盐水剂下能正常生长。新型高抗草甘膦基因的获得打破了跨国公司的技术垄

断，突破了我国抗草甘膦转基因作物产业化的技术瓶颈。目前，采用上述新型高抗草苷膦基因进展

转基因棉花和油菜的工作也在进展之中。

转植酸酶基因玉米的研制饲料中玉米的用量高达50%以上，我国玉米产量的60%用于饲料加工。第一

代植酸酶产品以微生物发酵为根底用作饲料添加剂。该项研究工作进一步利用种子生物反响器生产

第二代植酸酶产品直接用于饲料加工。将具有自主知识产权的植酸酶基因转化玉米，经过六代选

育，得到了表达植酸酶活性到达1000~40，000单位/公斤种子的转基因玉米纯合系，并稳定遗传。

转基因玉米动物饲喂的实验结果，证明转植酸酶基因玉米可以替代微生物发酵生产的植酸酶添加

剂，满足饲料加工标准的要求。转基因玉米进入环境释放平安评价阶段并申请了