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运用NMR研究白蛋白与脂肪酸的相互作用

高东莉;孙鹏;王倩文;刘买利;张许

【摘要】脂肪酸在哺乳动物的能量代谢中发挥着至关重要的作用,同时也是合成细

胞膜磷脂和其他生物活性化合物的重要物质.脂肪酸在血液中的溶解度很低,主要以

与蛋白质结合状态存在,白蛋白是游离脂肪酸的主要运输者和储存者.因此,研究脂肪

酸和白蛋白的相互作用具有非常重要的医学和生物学意义.本文主要利用基于核磁

共振(NMR)的组氨酸选择性检测技术T2W-RD-WaterLOGSY研究天然同位素丰

度人血清白蛋白(HSA)与脂肪酸的相互作用,结果发现脂肪酸结合前后,HSA的特征

组氨酸谱图变化明显,部分组氨酸信号的相对强度随脂肪酸浓度的增加而不断减小,

相应的滴定曲线分析表明HSA表面有两个强的脂肪酸结合位点.此外,部分谱线的

化学位移变化说明HSA和脂肪酸的强结合还会引发HSA相应的构象变化.

【期刊名称】《波谱学杂志》

【年(卷),期】2018(035)003

【总页数】7页(P338-344)

【关键词】核磁共振(NMR);T2W-RD-WaterLOGSY;人血清白蛋白(HAS);脂肪酸;

组氨酸

【作者】高东莉;孙鹏;王倩文;刘买利;张许

【作者单位】中国科学院大学,北京100049;波谱与原子分子物理国家重点实验室,

武汉磁共振中心(中国科学院武汉物理与数学研究所),湖北武汉430071;波谱与原

子分子物理国家重点实验室,武汉磁共振中心(中国科学院武汉物理与数学研究所),

湖北武汉430071;中国科学院大学,北京100049;波谱与原子分子物理国家重点实

验室,武汉磁共振中心(中国科学院武汉物理与数学研究所),湖北武汉430071;波谱

与原子分子物理国家重点实验室,武汉磁共振中心(中国科学院武汉物理与数学研究

所),湖北武汉430071;波谱与原子分子物理国家重点实验室,武汉磁共振中心(中国

科学院武汉物理与数学研究所),湖北武汉430071

【正文语种】中文

【中图分类】O482.53

引言

脊椎动物体内含有非常丰富的白蛋白，而人血清白蛋白（HumanSerum

Albumin，HSA）在人体血清中含量高达血清蛋白总量的60%~65%，其主要作

用是调节渗透压.功能上，白蛋白作为转运蛋白可以广泛运载和短暂存储各种内源

性与外源性的化合物，例如转运脂肪酸、影响多种药物的代谢动力学、清理有毒代

谢物、提高血清抗氧化能力等[1].早在1941年，Kendall等人[2]就首次发现HSA

结合脂肪酸（FattyAcid，FA）的现象，当时提出“血清中某些染料使白蛋白重结

晶4次之后仍然呈现黄色，怀疑这些染料本质上可能是类脂”.随后的几十年中，

随着科学技术的进步，不断有研究进一步揭示白蛋白结合脂肪酸的能力.晶体结构

显示[3]，白蛋白表面以非对称的形式分布着7个当量的中长链脂肪酸结合位点，

并有着不同的结合强度，表明白蛋白与脂肪酸的作用形式复杂多样.在正常的人生

理条件下，每摩尔HSA大约可以结合0.1~2.0mol脂肪酸[4].目前，人们对脂肪

酸的摄取主要是饱和脂肪酸，越来越多的研究表明，脂肪酸与许多疾病，包括癌症

的产生都有着密切关系，且游离脂肪酸对机体脂代谢的反应比甘油三酯和胆固醇更

为灵敏，一些重要游离脂肪酸含量的异常变化是病情发展的重要依据.然而由于游

离脂肪酸的水溶性极差，通常需要结合血清白蛋白进行储存和运输，因此对人体血

液中白蛋白与脂肪酸的相互作用研究具有非常重要的意义.

研究表明，在蛋白质与配体的相互作用中，组氨酸（Histidine,His）是常见的活

性中心，具有重要的功能，并发挥着不可替代的作用.这主要得益于其独特的分子

结构，组氨酸有一个咪唑侧链，咪唑环侧链的pKa约为6.0，使得组氨酸的pKa

相对中性，这就意味着在细胞中很小的pH变化都会引起组氨酸的电荷变化[5].正

因为如此，组氨酸在各种蛋白中常作为配体结合位点，同时也作为酶催化的活性中

心，例如促胰凝素的催化功能[6].从本质上讲，咪唑侧链上有两个性质不同的氮原

子，其中一个结合氢原子呈弱酸性，另一个含孤电子对呈碱性，因此组氨酸既可以

作为酸提供质子，又可以作为碱接受质子，还可以同时作为氢键供体和氢键受体.

在生理条件下，组氨酸同时以3种不同的