不同产地枇杷叶抗氧化活性研究.pdf

摘要

枇杷叶EriobotryaFolium为蔷薇科枇杷属植物枇杷Eriobotryajaponica（Thunb.）

Lindl.的干燥叶。枇杷叶具有祛痰止咳、抗炎、抗肺纤维化、抗氧化、降血糖、抗肿

瘤、止呕等药理作用。枇杷叶在川渝地区有大规模人工栽培有大量文献报道，枇杷

叶具有较高的抗氧化活性，为了更加深入的研究枇杷叶抗氧化活性，本文进行了以

下四方面的研究：

1.枇杷叶抗氧化活性组分提取与纯化

比较提取方法（超声提取、回流提取、索氏回流提取）、以乙醇体积分数（水、

20%、40%、60%、80%、100%）、提取温度（40、50、60、70、80）、提取时间

（30min、45min、60min、75min、90min、100min）、料液比（1：5、1：10、1：15、

1：20、1：25）为单因素考察，结果表明超声提取最佳，以单因素乙醇体积分数、

提取温度、提取时间、料液比设计响应曲面法（BBD）优化提取枇杷叶总黄酮工艺，

得到最佳工艺流程：乙醇体积分数47%，料液比1:26，提取时间66min，提取温度

62℃，在此条件下，枇杷叶总黄酮提取量为69.459mg/g。

抗氧化活性组分的筛选。采用大孔树脂富集方法，以洗脱液浓度为自变量（60%

乙醇、30%乙醇、90%乙醇、总提取物、水），以总黄酮、总酚含量、DPPH·自由基

清除率、ABTS+自由基清除率、FRAP还原力为因变量，结果表明，在60%乙醇洗

脱物中总黄酮、总酚含量最高，DPPH·自由基清除率、ABTS+自由基清除率最佳、

FRAP还原力抗氧化结果最优。

2.不同产地枇杷叶的总黄酮、总酚含量与抗氧化活性能力评价

测定并分析评价了26批不同产地枇杷叶的活性成分含量与抗氧化活性能力。对

上述大孔树脂吸附后的60%乙醇洗脱组分进行富集，鼓风干燥后分别稀释至0.1、

+

0.2、0.4、0.6、0.8、1、1.42mg/mL，采用DPPH、ABTS清除自由基和FRAP总还

原力进行测定，计算IC50值（半数清除浓度），并进行聚类、主成分分析。结果表明，

26批次枇杷叶提取物清除DPPH·自由基的IC50值在34.870~601.750µg/mL之间，清

除ABTS+自由基的IC50值在0.114~249.700µg/mL之间，FRAP总还原能力在

365.537~1669.019µg/mL之间，总黄酮含量在207.326~147.598mg/之间，总酚含量在

52.971~38.240mg/g之间，其中S17（重庆市万州区）、S15（重庆市万州区）的总黄

I

+

酮、总酚含量最高。S17的DPPH·和ABTS清除自由基能力和总还原能力都高于其

他产地枇杷叶。S08（湖北省黄石市铁山区铜鼓大道）、S11（重庆市忠县三汇镇）的

总黄酮与总酚含量较低，S02（重庆市丰都县董家镇）、S11（重庆市忠县三汇镇）的

两种清除自由基能力和总还原能力都低于其他产地枇杷叶。

3.枇杷叶色谱指纹图谱的建立

采用HPLC建立了26批次枇杷叶的叠加指纹图谱，采用相似性分析（SA）、聚

类分析（HCA）和主成分分析（PCA）完成了26批枇杷叶的全分析，获得了枇杷叶

的标准色谱指纹图谱。得到了21个共有峰，其中除S2外，其余相似度在

0.856~0.998之间。聚类分析将26批枇杷叶分为4大类，PCA得到共有峰F2、F3、

F4、F6、F7、F8、F9、F10、F11、F14的化合物贡献率最好，同时S17的综合排名

最好，S15（重庆市万州区）、S5（重庆市万州区百安坝街道）次之，聚类分析结果

与主成分分析中的主成分综合得分排序结果一致。

4.枇杷叶抗氧化活性成分的谱效关联研究

采用双变量相关性评价（BCA）、偏最小二乘回归法（PLS）将枇杷叶提取物的

指纹图