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基因工程知识点总结
选修3易考知识点背诵
专题1基因工程
基因工程的概念
基因工程的别名
操作环境
操作对象
操作水平
基本过程
结果
特点
基因拼接技术或DNA重组技术
生物体外
基因
DNA分子水平
剪切→拼接→导入→表达
产生人类需要的基因产物
打破种的界限,定向改造生物
本质基因重组
(一)基因工程的基本工具
1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶(限制酶)
(2)功能:能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷
酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的
磷酸二酯键断开,因此具有特异性。
(3)结果:经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有
两种形式:黏性末端和平末端。2.“分子缝合针”——DNA连
接酶
(1)两种DNA连接酶(E·coliDNA连接酶和T
4-
DNA连接酶)的比较:
①相同点:都缝合磷酸二酯键。
4
噬菌体,只能将双链DNA片段互补的黏性末了之间的磷
酸二酯键连接起来;
而T
4
DNA连接酶能缝合两种末端,但连接平末端的之间的效
率较低。
(2)与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将单个核
苷酸加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯键。DN
A连接酶是连接两个DNA片段的末端,形成磷酸二酯键。
3.“分子运输车”——载体
(1)载体具备的条件:①能在受体细胞中复制并稳定保
存。
②具有一至多个限制酶切点,供外源DNA片段插入。
③具有标记基因,供重组DNA的鉴定和选择。
(2)最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、布局简朴的、
自力于细菌染色体之外,并具有自我复制能力的双
链环状DNA分子。
(3)其它载体:噬菌体、动植物病毒
(二)基因工程的基本操作程序
第一步:目的基因的获取
1.目的基因是指:是人们所需要转移或改造的基因
2.获取目的基因的方法_____________________________
_____________
3.原核基因采取直接分离获得,真核基因是人工合成。人
工合成目的基因的常用方法有反转录法_和化学合成法_。
4.PCR技术扩增目的基因
(1)原理:DNA双链复制
(2)过程:第一步:加热至90~95℃DNA解链;第二
步:冷却到55~60℃,引物联合到互补DNA链;第三步:加
热至70~75℃,热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。
第二步:重组DNA分子
1.目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且能够遗
传至下一代,使目的基因能够表达和施展作用。2.构成:目的
基因+启动子+终止子+标记基因+复制原点
(1)启动子:是一段有特殊结构的DNA片段,位于基
因的首端,是RNA聚合酶识别和结合的部位,能驱动基因转
录出mRNA,最终获得所需的蛋白质。
(2)终止子:也是一段有特殊结构的DNA片段,位于
基因的尾端。
(3)标记基因的作用:是为了鉴定受体细胞中是否含有
目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记
基因是抗生素基因。
1
第三步:转化受体细胞
1.转化的概念:是目的基因进入受体细胞内,并且在受体
细胞内维持稳定和表达的过程。2.常用的转化方法:
将目的基因导入植物细胞:采用最多的方法是农杆菌转化
法,其次还有基因枪法和花粉管通道法等。将目的基因导入动
物细胞:最常用的方法是显微注射技术。此方法的受体细胞多
是受精卵。将目的基因导入微生物细胞:原核生物作为受体细
胞的原因是繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少,最常
2+用的原核细胞是大肠杆菌,其转化办法是:先用Ca处
置惩罚细胞,使其成为感受态细胞,再将重组表达载体DNA
分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合,在一定的温度下促进感
受态细胞接收
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