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基因工程知识点总结

选修3易考知识点背诵

专题1基因工程

基因工程的概念

基因工程的别名

操作环境

操作对象

操作水平

基本过程

结果

特点

基因拼接技术或DNA重组技术

生物体外

基因

DNA分子水平

剪切→拼接→导入→表达

产生人类需要的基因产物

打破种的界限，定向改造生物

本质基因重组

（一）基因工程的基本工具

1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）

（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷

酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的

磷酸二酯键断开，因此具有特异性。

（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有

两种形式：黏性末端和平末端。2.“分子缝合针”——DNA连

接酶

(1)两种DNA连接酶（E·coliDNA连接酶和T

4-

DNA连接酶）的比较：

①相同点：都缝合磷酸二酯键。

4

噬菌体，只能将双链DNA片段互补的黏性末了之间的磷

酸二酯键连接起来；

而T

4

DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效

率较低。

(2)与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将单个核

苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DN

A连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。

3.“分子运输车”——载体

（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保

存。

②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。

③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。

（2）最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、布局简朴的、

自力于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双

链环状DNA分子。

（3）其它载体：噬菌体、动植物病毒

(二)基因工程的基本操作程序

第一步：目的基因的获取

1.目的基因是指：是人们所需要转移或改造的基因

2.获取目的基因的方法_____________________________

_____________

3.原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成。人

工合成目的基因的常用方法有反转录法_和化学合成法_。

4.PCR技术扩增目的基因

（1）原理：DNA双链复制

（2）过程：第一步：加热至90～95℃DNA解链；第二

步：冷却到55～60℃，引物联合到互补DNA链；第三步：加

热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。

第二步：重组DNA分子

1.目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且能够遗

传至下一代，使目的基因能够表达和施展作用。2.构成：目的

基因＋启动子＋终止子＋标记基因+复制原点

（1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基

因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转

录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。

（2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段，位于

基因的尾端。

（3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有

目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记

基因是抗生素基因。

1

第三步：转化受体细胞

1.转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体

细胞内维持稳定和表达的过程。2.常用的转化方法：

将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是农杆菌转化

法，其次还有基因枪法和花粉管通道法等。将目的基因导入动

物细胞：最常用的方法是显微注射技术。此方法的受体细胞多

是受精卵。将目的基因导入微生物细胞：原核生物作为受体细

胞的原因是繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少，最常

2+用的原核细胞是大肠杆菌，其转化办法是：先用Ca处

置惩罚细胞，使其成为感受态细胞，再将重组表达载体DNA

分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感

受态细胞接收