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一抗、二抗的选择
编辑课件
一抗的选择
•1.分析实验应用类型
•WB〔WesternBlot免疫印迹〕
•IHC〔immunohistochemistry免疫组织化学〕
•ELISA〔enzyme-linkedimmunoadsordent
assay酶联免疫吸附试验〕
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•2.样本蛋白的结构性质
蛋白片断或一种用含此片段域
•样本蛋白的结构域特殊的同型物或的免疫原制备
蛋白全长的某一
区域出的抗体。
•全长蛋白、蛋白片段、
多肽、用FACS流式检
用含该外表蛋
•细菌、细胞测活细胞的外表白的胞外域来
蛋白免疫制备的抗
•体。
•样本的提取和处理过程
•某些抗体要求样本经过
某些特殊处理,例如:
许多抗体只识别复原和
编辑课件
变性的、表位已暴露不
•3.样本的物种
•
选择物种相同或有交叉反响的抗体,抗体
可能与不同物种的同种靶蛋白有交叉反响,
因其氨基酸序列同源性较高,如果样本的
种类未列入抗体说明书上的交叉反响种属
表中,并不意味着该抗体不适用于检测该
物种的蛋白,而只是表示该物种尚未用此
抗体检测验证过,应通过序列比对的方法
来预测交叉反响,可应用Expasy
和
NCBI
BLAST来进行不同物种蛋白同源性
比对。
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•4.一抗宿主物种的选择
•一般说来,在使用偶联二抗结合无偶联物的一抗时,一抗
宿主动物的物种选择较为重要,对于免疫组化而言,尽可
能选择与样本不同种系物种的一抗,从而防止二抗与样本
内源性免疫球蛋白产生交叉反响,
•例如:检测小鼠样本蛋白,那么不应选择小鼠或大鼠源的
一抗,最好选兔源的一抗,那么二抗那么可选择偶联了检
测分子〔酶、荧光素、生物素等〕的抗兔IgG。
•如果选择有偶联物的一抗那么不适用上述情况,除免疫组
化外的其它对不含内源性免疫球蛋白样本的检测方法,那
么抗体宿主物种的影响不大,如对不含IgG的细胞裂解物
样本的western
blotting检测,尽管如此,含有血清的组织
裂解物和组织培养上清中含有免疫球蛋白,复原变性样本
中含IgG,在western
blot检测中那么结合出现IgG分子
50
and
25
kDa的重链和轻链条带。
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二抗的选择
•1.一抗的种属来源
二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源,
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•2.二抗的种属来源
•一般来说,不同的种属来源与二抗的质量
没有必然的联系,来源于山羊的二抗与来
源于驴的二抗在一般的实验里没有太多的
差异。
•
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