粉葛健康种苗生产技术规程.docx

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粉葛健康种苗生产技术规程

1范围

本标准规定了粉葛组织培养繁殖过程中的术语和定义、培养基制备、组培室消毒灭菌、抱子组培苗

生产等方面的技术规程。

本标准适用于粉葛组织培养繁殖苗木。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

DB15/T1939—2020文冠果组织培养育苗技术规程

NY/T391绿色食品产地环境质量

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1外植体explant

植物组织培养中作为离体培养材料的器官或组织的片段。外植体通常选择生长健壮的无病虫的植株

上的正常器官或组织。

3.2接种inoculation

在无菌条件下将表面灭菌后的外植体或继代、生根组培材料接入培养基的过程。

4培养基配制

4.1培养基配方

MS培养基：具体成分见附录A中的表A.1。

制备用于不定芽诱导的培养基，配方为：在所述MS培养基上添加浓度为15mg/L聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、6-苄氨基嘌呤（6-BA）和吲哚丁酸（IBA）；在不定芽诱导培养基中6-苄氨基嘌呤（6-BA）的

浓度为1.0mg/L，吲哚丁酸（IBA）的浓度为0.2mg/L。

制备用于继代增殖的培养基，配方为：在所述添加浓度为15mg/L聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的MS培养基的基础上添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）和吲哚丁酸（IBA），在继代增殖培养基中6-苄氨基嘌呤（6-BA）

的浓度为1.0mg/L，吲哚丁酸（IBA）的浓度为0.5mg/L。

制备用于无菌生根的培养基，配方为：在所述添加浓度为15mg/L聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的MS培

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养基的基础上添加吲哚丁酸（IBA）和萘乙酸（NAA），在生根培养基中吲哚丁酸（IBA）的浓度为0.5

mg/L，萘乙酸（NAA）的浓度为1mg/L。

4.1培养基母液及培养基配制

按照DB15/T1939—2020执行。

4.2环境与器具消毒灭菌

按照DB15/T1939—2020执行。

5组织培养技术

5.1外植体及其消毒

选取生长健康的粉葛幼嫩的枝条作为外植体，用中性洗涤剂洗涤洗枝条，以去除枝条表面的污垢，然后去除多余的叶片，干净纸巾吸干表面水分，在超净工作台上，先用70%酒精浸泡20s，再用无菌水冲洗3次，每次4min，立即转入0.2%的升汞溶液中消毒10min，最后用无菌水洗涤4次，每次5min，

得到消毒外植体。

5.2不定芽诱导

在超净工作台内，在体视显微镜下从外植体上取约0.5mm大小的茎尖生长点，然后将茎段接种于用于不定芽诱导的培养基；每瓶接1个外植体，分布均匀，封好瓶口后，注明品种代号、接种人员及日

期等，放至培养室培养，诱导培养1个月，得到粉葛不定芽。

诱导培养条件如下：温度为26±3℃,湿度为80-90%，光照时间为14h/d，光照强度为800-12001x。

5.3继代增殖

将不定芽诱接入继代培养基，置于培养室培养，继代培养20-25d，得到粉葛丛芽。

接种数量根据培养容器的大小决定，要求材料摆布均匀，间距1.0cm-2.0cm。

继代增殖培养条件如下：温度为28±2℃,湿度为60-80%，光照时间为14h/d，光照强度为800-12001x。

5.4无菌生根

当继代增殖培养的粉葛无菌苗生长到3.0cm-5.0cm时，进行切繁，并保持每株均有一个不定芽，

接入用于无菌生根的培养基中进行生根培养15-20d，得到粉葛幼苗。

接种数量根据培养容器的大小决定，要求材料摆布均匀，间距1.0cm-2.0cm。无菌苗在培养基中的

插入深度为5mm-8mm，保持壮苗直立。

生根培养条件如下：培养温度为26±3℃,湿度为50-65%，光照时间为14h/d，光照强度为10001x。

5.5炼苗

香芋幼苗生长至根长0.3cm、苗高5cm后，将培养瓶瓶盖打开，室内炼苗培养5-7d，

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5.6假植

然后洗净根部培养基，浸泡0.1%多菌灵溶液10分钟，将组培种植装有泥炭土的营养杯中，基质为泥炭土与园土，比例为5：1，浇定根水1-2次，保持叶面湿度。保持棚内温度25-30℃,浇水遵循见干

见湿原则。

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附录A

（资料性附录）

表A.1MS培养基混合母液配制表

母液名称

编号

化试名称

mg/L

扩大倍数

扩大后称

mg

母液定容体积mL

配置培养基吸取量mL/L

大量元素

A

N