C-反应蛋白促进LDL跨内皮细胞穿胞的机制及其在动脉粥样硬化发生中的作.pdf

C-反响蛋白促进LDL跨内皮细胞穿胞的机制及其在动脉粥样硬化发

生中的作用

目的：动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是许多心、脑血管病的共同发病学根

,

底,其发病机制尚为了完全说明.众多AS发病学说中广受关注的是脂蛋白滞留反响学

说.

该学说认为了,低密度脂蛋白(Lowdensitylipoprotein,LDL)在血管内膜下

,(

的沉积是AS发生的始动环节.钻研发现LDL通过穿胞Transcytosis)作用进入并滞留

于血管内皮细胞(Endothelialcells,ECs)下.

,

C-反响蛋白(C-reactiveprotein,CRP)是一种重要的炎症因子与AS的发

生关系密切.CRF^否可以通过促进LDL在ECs中穿胞并促进AS发生尚不活楚.

本局部旨在钻研CRFMLDL在ECs中穿胞的影响及其相关机制以及其在AS发生

中的作用.方法：通过LDL体外穿胞模型检测穿胞抑制剂、活性氧(Reactiveoxygen

species,ROS)相关抑制剂以及蛋白激酶抑制剂对CRF^I起的LDL穿胞的影响；不连

续密度梯度超速离心法提取脂筏检测CRFM胞吞相关蛋白

(也

(Caveolin-1、Cavin-1、Dynamin-2)及胞吐相关蛋白NSF、-SNAR

VAMP3/Cellubrevin、Syntaxin4)表达的影响；DCF(Dichlorofluorescein)荧光法检测

CRFM细胞内RO眺成的影响；ELISA法检测CRFM蛋白激酶C(ProteinkinaseC,

PKC利Src激酶活性的影响；激光共聚焦成像打量ECs对LDL的内吞摄取及LDL

,

在人脐静脉血管壁的滞留情况；在ApoE-/-小鼠AS模型中通过油红O染色打量主动

,

脉根部的脂质沉积情况免疫组化检测斑块中早期AS标志分子CD154B勺表达改变.

结果：通过LDL体外穿胞模型发现,CRP能够明显促进LDL跨内皮细胞穿胞,

穿胞抑制剂N-ethylmaleimide(NEM利Methyl-6-cyclodextrin(M0CD卜ROS生成

抑制剂Diphenyleneiodonium(DPI)、筑基保护剂Dithiothreitol(DTT)、

PKCW制剂BisindolylmaleimideI(BIMI)和Src激酶抑制剂PP2会明显抑制CR可起

的LDL穿胞；CRFW以促进脂筏中穿胞相关分子(Caveolin-1、Cavin-1、Dynamin-2、

NSF也-SNAPVAMP3/Cellubrevin、Syntaxin4)表达,并可被上述抑制剂不同程度抑

制；同时发现,外源性ROS(H2O2)也能促进LDL跨内皮细胞穿胞.DCF%检测发现CR

阿以促进内皮细胞产生ROS,DPI和DTT能拮抗CRP勺促ROST生作用.

ELISA方法检测发现CR弛上调PK兽日Src活性；激光共聚焦检测发现,穿胞抑

制剂M0CDNEM,ROSffi关抑制剂DPI、DTTW激酶抑制剂BIMI、PP2均能不同程

度减少CRP引起的促ECs摄取LDL颗粒及促LDL在血管内皮下的