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实验四细菌的划线分离与培养
实验四细菌的划线分离与培养
一、实验前要说明的几点问题
点名,查看学生出勤情况。总结上次作业,提出作业中出现的问题
并讲解。
二、板书部分
(一)目的要求
1.掌握需氧菌分离培养的基本要领。
2.了解厌氧菌的分离培养原则及方法。
(二)实验容
1.用普通琼脂平板做一次划线分离培养。
2.用普通肉汤做一管大肠杆菌的移植培养。
3.用普通琼脂斜面做一管金黄葡萄球菌的移植培养。
4.用划线法进行真菌的分离培养(示教)
(三)作业
1.为什么要进行细菌的分离培养?
2.进行分离培养应注意哪些事项?
3.细菌分离培养的方法有哪些?(重点叙述平板划线法)
4.叙述真菌的划线分离方法。
三、实验容
主要容有分离培养及目的、注意事项、分离培养的方法、真菌的
培养方法、患病动物病料中分离培养、钓菌、移植。
1.什么是分离培养及目的:分离培养是细菌学检验的基本技术之
一。分离培养之目的,在于从被检材料中由多种细菌里分离出一种细
菌。
2.注意事项:
1)分离培养前应考虑所分离的细菌的特性,选择适合其生长需要
的培养基(需氧还是厌氧、营养的要求高还是不高、培养温度等)等。
例如:链球菌在普通琼脂不长,要加血清或血液。大肠杆菌和葡萄球
菌要求较低,普通的培养基即可生长。
2)防止污染。分离培养的整个过程要严格无菌操作。培养基和一
切用具必
须彻底灭菌;操作时必须靠近火焰;操作完毕后,禁止再让培养
基接触外界空气。
3)防止接种器械过热,很容易杀死分离培养的细菌,如接种环在
烧灼灭菌后,不能立即钓取细菌材料,应在酒精灯旁凉凉;另外还应
注意防止已钓取菌料的接种环,不慎通过火焰而将细菌杀死。
4)初代分离时发现有多种细菌,观察找到目的菌落,再拿一肉汤
培养基纯化培养。然后在接种实验动物,作成凝集抗原,做血清学鉴
定,。还可以反过来做抹片染色观察。
3.分离培养的方法:
主要分需氧菌的分离培养方法、厌氧菌的分离培养方法和需要CO
菌的培养分离方法。
1)需氧菌的分离培养法
(1)平板划线法:划线后有单个菌落,便于观察菌落的形态、溶
血性等。方法左手拿琼脂平板,使其与水平面成45。角;右手拿铂金
耳,使之与水平面平行,靠近酒精灯火焰操作。将接种环于酒精灯火
焰中灼烧灭菌,待其冷却后,蘸取欲检材料少许,注意不要划破琼脂,
不要划得太疏,以免造成浪费,不要重复划线,以免形成菌苔。划线
方法:方格划线、蛇形划线、区域划线、交叉划线,选择其中一种进
行划线。划毕,将接种环烧灼灭菌,于皿底用蜡笔标记被检材料名称
及日期,倒转置恒温箱中培养。
思考题:方格划线哪个地方会长出单个菌落比较多?
(2)倾注法:不常用,这里不做介绍
2)厌氧菌的分离培养方法
厌氧菌生长繁殖的环境不能有游离氧的存在。故在培养厌氧菌时,
必须创造一个厌氧环境,一般以降低氧的力或保持减低的氧力为原则。
目前应用于厌氧菌的分离方法颇多,现就其中较简便且常用的几种方
法介绍如下:
(1)焦性没食子酸法利用焦性没食子酸在碱性溶液能大量地吸收
氧的原理进行厌氧培养。通常100cm3空间用焦性没食子酸1g,10%
氢氧化钠或氢氧化钾10ml。具体方法有下列有平板培养法、干燥器培
养法。平板培养法是将厌氧菌划线接种于适宜的琼脂平板,取一小团
直径约2cm的脱脂棉,置于平皿盖的面中央,其上滴加10%氢氧化钠
溶液约5ml;在靠近脱脂棉的一侧放置焦性没食子酸约
0.5g,注意暂勿使两者接触,立即将已接种好的平板覆盖于平皿盖
上,迅速用融化的石蜡密封平皿边缘周围。封毕,轻轻摇动平皿,使
被氢氧化钠溶液浸湿的脱脂棉与焦性没食子酸接触,然后置37℃恒温
箱中培养之。干燥器培养法是于干燥器底部放入氢氧化钠溶液适量,
然后再放入2-3个略高于液面的玻璃圆柱(如链霉素小瓶),将适量
焦性没食子酸用纸或纱布包好,放置于圆柱上面,使暂勿与氢氧化钠
接触,然后放下隔板,将已接种的培养皿或试管置于隔板上,待一切
准备好后,将盖盖好密封,并轻轻摇动干燥器,
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