第5章 单克隆抗体(改).pptVIP

5.2人源性单克隆抗体的制备多克隆抗体鼠源单克隆抗体人-鼠嵌合抗体人源化抗体全人源抗体鼠源单抗临床应用的障碍血清半衰期短，20h抗原抗体结合力、亲和力不够募集效应细胞产生副作用HAMA反应：8－10天出现，20－30天高峰,加速单抗清除。过敏休克HAMA反应

HumanAnti-MouseAntibodies鼠来源的单抗在人体内是外源物质，很可能会产生人体免疫系统对它的排斥反应：产生抗鼠的抗体，叫做人抗鼠抗体（HAMA）反应。HAMA反应对鼠源的单抗分子有着较强的破坏作用，严重影响了鼠源单抗在人体内的功效，所以非常有必要改进鼠源单抗。抗体研究的世代第一代多克隆抗体第二代单克隆抗体第三代基因工程抗体抗体的结构及其多样性互补决定区complementaritydeterminingregions(CDR)5.2人源性单克隆抗体的制备5.2.1EB病毒转化技术5.2.2细胞工程单克隆抗体技术1人-鼠杂交瘤单克隆抗体2人-人杂交瘤单克隆抗体3EB病毒转化-融合技术4转基因动物制备单克隆抗体5重症联合免疫缺陷小鼠制备单克隆抗体5.2.3人单抗制备技术的发展（新基因工程技术）5.2.1EB病毒转化技术EB病毒（epstein-barrvirus,EBv）是epstein和barr于1964年首次成功地将burkitt非洲儿童淋巴瘤细胞通过体外悬浮培养而建株，并在建株细胞涂片中用电镜观察到疱疹病毒颗粒，故名。EB病毒的形态与其他疱疹病毒相似。EB病毒仅能在B淋巴细胞中增殖，可使其转化，能长期传代。EB病毒转化淋巴细胞5.2.2细胞工程单克隆抗体技术

1人-鼠杂交瘤单克隆抗体人脾细胞＋鼠骨髓瘤细胞5.2.2细胞工程单克隆抗体技术

2人-人杂交瘤单克隆抗体人脾细胞＋人骨髓瘤细胞细胞种类少5.2.2细胞工程单克隆抗体技术

3EB病毒转化-融合技术利用EB病毒转化B淋巴细胞为永生细胞与鼠骨髓瘤细胞融合5.2.2细胞工程单克隆抗体技术

4转基因动物制备单克隆抗体人抗体基因(除CDR)导入小鼠胚胎转基因小鼠抗原免疫5.2.2细胞工程单克隆抗体技术

5重症联合免疫缺陷小鼠制备单克隆抗体SCID:severecombinedimmunodeficiencymouse既无有功能的T细胞也无B细胞的小鼠,对异源移植物不产生任何排斥反应,可以作为良好的载体系统用于医学及生物学各个领域的研究,但极易感染病菌,饲养和操作管理十分复杂。SCIDSCID:SevereCombinedImmunodeficiency1)TumorsfromotherspeciesareeasilytransplantedintoSCIDmiceandwillgrowwithoutbeingrejected.2)SCIDmiceareevenmoreimmunodeficientthannudemice.3)SCIDmiceareidealforthegrowthofhybridomasinvivotoproduceacontinuoussupplyofantibody.重症联合免疫缺陷小鼠制备单克隆抗体将人淋巴细胞移植到小鼠体内抗原免疫标准杂交瘤方法或制备抗体库裸鼠T淋巴细胞功能缺陷1962年偶然发现有个别无毛小鼠，后来证实是由于基因突变造成的并伴有先天性胸腺发育不良，称为裸小鼠(nudemice)，用“nu”表示裸基因符号。裸小鼠是由于染色体上等位基因(第11对染色体上)突变引起的，已失去正常胸腺。特性裸小鼠的主要特征表现为无毛(hairless)和无胸腺(athymus)。随着鼠龄增加皮肤变薄、头颈部皮皱褶、发育迟缓。由于无胸腺,仅有胸腺残迹或异常上皮,这种上皮不能使T细胞正常分化，缺乏成熟T细胞的辅助、抑制及杀伤功能，因而细胞免疫力低下。裸小鼠B淋巴细胞正常，但功能欠正常繁殖裸鼠抵抗力差，易患病毒性肝炎和肺炎，因而饲养和繁殖要求条件比较严格，在SPF（无特定病原(SpecificPathogenFree)）环境下可生存，所用的笼具、垫料、饲料、饮水等都要求经过严密灭菌消毒并采用隔离器饲养，以保证长期存活并进行繁殖。由于纯合型雌裸小鼠nu/nu受孕率低，乳腺发育不良且有食仔的习惯，因此生产上一般采用纯合型雄鼠与杂合型雌鼠交配(♂nu/nu×♀nu/＋)可获1/2纯合型仔代。饲