PEI介导动物细胞瞬时表达的开题报告.pdfVIP

PEI介导动物细胞瞬时表达的开题报告

开题报告

题目：PEI介导动物细胞瞬时表达

一、研究背景和意义

在基因功能研究或药物开发过程中，需要对目标基因进行表达；同

时，需要对各种因素对基因表达的影响进行研究。传统的表达系统往往

需要构建表达载体并转染进细胞，然而该方法操作繁琐，并且时间长，

还存在难以保持稳定表达及诱导细胞毒性等缺点。因此，近年来瞬时表

达技术（Transgenictechnology）受到越来越多的关注。

瞬时表达技术是将目标基因转染到细胞中，在少量的时间内获得较

大量的蛋白质表达，其快速、高效、简便的优点，受到广泛应用。当然，

用于瞬时表达的载体必须要实现快速的转染和高效的表达，而聚乙烯酰

胺（PEI）即可作为一种强效的转染剂在此背景下得到了广泛应用。

PEI具有优秀的生物相容性、低毒性和水溶性，同时和DNA和RNA

在界面电势上有显著的成分相容性。因此，PEI介导的瞬时表达逐渐成为

一种重要的表达方法。本论文将从PEI介导动物细胞瞬时表达展开进一

步的研究。

二、研究目标

本文主要研究PEI介导动物细胞的瞬时表达。通过利用荧光蛋白

（GFP）作为标记蛋白，并且与PEI组合，将其导入到细胞内，进一步验

证PEI在瞬时表达中的效果和可行性。同时，通过对PEI介导的瞬时表

达和传统表达系统的比较，分析其优缺点和适用范围，为后续的实验提

供实验基础。

三、研究方法和技术路线

本文的实验方法主要包括以下几个步骤：

1.质粒构建：从限制性酶切位点进行限制性酶切，利用T4DNA连接

酶进行克隆操作，构建得到所需的表达质粒。

2.细胞培养及转染：选取样本细胞进行细胞培养，将转化后的表达

质粒利用PEI进行包裹得到PEI-DNA复合物，并通过复合物进行细胞转

染。

3.荧光显微镜观察：利用荧光显微镜观察靶细胞中GFP的表达情况。

4.WesternBlot：收集细胞整体蛋白，利用其进行SDS电泳

和半干膜转印，结合特异性抗体进行蛋白质表达水平的检测。

五、预期成果

通过本研究，我们期望能够探明PEI介导的瞬时表达技术在动物细

胞中的应用效果，并且通过分析研究数据，比较PEI介导瞬时表达与其

他表达系统之间的优缺点，为后续的实验提供可参考的研究依据；最终

期望为基因工程学乃至药物开发提供一些有益的参考线索。