DB11T 829-2011 白菜品种纯度及真实性分子检测方法.docxVIP

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B21备案号：

B21

北京市地方标准

DB11/T829—2011

白菜品种纯度及真实性分子检测方法

MethodsofidentifyingvarietalpurityandgenuinenessofChinese

cabbagebyusingmolecularmarkers

2011-11-10发布2012-03-01实施北京市质量技术监督局发布

DB11/T829—2011

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语与定义 1

4原理 2

5仪器设备及耗材 2

6试剂和溶液配制 2

7引物选用原则及筛选方法 3

8操作步骤 4

9检测结果 6

附录A(规范性附录)所用溶液的配置方法 8

附录B(资料性附录)白菜品种纯度检测常用的SSR引物名称及序列 11

附录C(资料性附录)白菜真实性鉴定常用的ISSR引物名称及序列 13

附录D(规范性附录)白菜基因组DNA提取方法 15

附录E(规范性附录)6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳方法 17

附录F(规范性附录)5%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳方法 19

1I

DB11/T829—2011

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由北京市农业局提出。

本标准由北京市农业标准化技术委员会归口。

本标准由北京市农业局组织实施。

本标准起草单位：北京市种子管理站。

标准主要起草人：田雷、赵山普、贾希海、赵青春、彭瑞迪、王辉、福德平、高勇、张连平、黄寰。

1

DB11/T829—2011

白菜品种纯度及真实性分子检测方法

1范围

本标准规定了结球白菜和不结球白菜种子品种纯度及真实性鉴定的SSR、ISSR分子标记检测方法和对检测结果的判定标准。

本标准适用于结球白菜和不结球白菜常规种子、杂交种子及其亲本的品种纯度和真实性鉴定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T3543.4农作物种子检验规程发芽试验

GB/T3543.5农作物种子检验规程真实性和品种纯度鉴定

3术语与定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

SSR标记simplesequencerepeatmarker,SSR

简单重复序列(SSR),又称短串联重复序列或微卫星序列，它是一类以1bp～5bp的短核苷酸序列为基本单位串联重复状分布于整个基因组内的重复序列。

3.2

ISSR标记intersimplesequencerepeatmarker,ISSR

内部简单重复序列(ISSR),是利用包含重复序列并在3’端或5’端锚定的单寡聚核苷酸引物对基因组进行扩增的标记系统，即用SSR引物来扩增重复序列之间的区域。

3.3

聚合酶链式反应polymerasechainreaction,PCR

一种用于在体外扩增DNA序列的技术程序。模板基因序列先经高温变性成为单链，在DNA聚合酶的作用和适宜的反应条件下，根据模板序列设计的两条引物分别与模板DNA两条链上相应的一段互补序列发生退火而相互结合，接着在DNA聚合酶的作用下以四种脱氧核糖核苷酸(dNTP)为底物，使引物得以延伸。然后不断重复变性、退火和延伸这一循环过程，使欲扩增的基因片段呈几何倍数扩增。

3.4

引物primer

2

DB11/T829—2011

在DNA合成反应时，提供3—OH末端作为DNA合成的起点，能够与DNA模板特定区域特异结合的多核苷酸单链。

4原理

简单重复序列(SSR)和内部简单重复序列(ISSR)广泛分布于白菜基因组的不同位置上。每个位点的重复单位或序列会因为品种的不同而存在遗传结构上的差异，这些差异表现为多态性。针对重复单位或序列的不同，设计相应的SSR引物和ISSR引物，通过PCR技术进行扩增、电泳、染色，形成白菜品种的SSR和ISSR指纹图谱，进行白菜品种纯度和真实性的鉴定。

5仪器设备及耗材

5.1仪器设备

5.1.1天平