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脂肪间充质干细胞促进皮肤创面修复及其作用机制探讨

大面积深度烧伤以及慢性难愈性创面修复一直是临床治疗的难点。随着干细胞研究的开展和深入，体内外实验证明位于皮下脂肪组织内的脂肪干细胞[1]（adipose-derivedstemcells,ADSCs）可以有效促进皮肤创面愈合。皮肤创面愈合[2]是一个复杂的多因素过程，涉及炎症反应、细胞增殖、细胞迁移、再上皮化、血管生成、细胞外基质沉积以及重塑等多方面。在创伤条件下，伤口渗液和其中的炎性因子以及有丝分裂原等趋化因子促进ADSCs增殖，向伤口迁移[3]。实验证明，ADSCs在体、内外均可以向皮肤表皮细胞、成纤维细胞和血管内皮细胞等多种细胞分化，分泌多种生物活性分子限制炎症和凋亡、促进血管形成、促进创周组织细胞，参与损伤修复等，最终实现促进创面愈合的作用。

1脂肪干细胞的生物学特性以及低免疫原性

ADSCs是成体间充质干细胞的一种，广泛分布于不同物种，如人、鼠、猪、犬及兔等不同部位的脂肪组织中。其数量巨大，1g脂肪组织可以产生大约5×103脂肪干细胞，大约是1g骨髓中获取干细胞数量的500倍；取材安全简便，在局麻下即可获取大量细胞，体外扩增和自我更新能力很强；可以向多种细胞系分化：脂肪、骨、软骨、骨骼肌、平滑肌、心肌、内皮、肝细胞、造血细胞以及神经元细胞[4-5]，ADSCs是真正意义上的具有多向分化潜能的干细胞。ADSCs具有间充质干细胞这一类细胞的特异性表面标记[6]，表达大量的粘附分子：ADSCs持续性表达CD9、整合素β1(CD29)和α4(CD49d)、细胞间粘附分子1(ICAM-1，即CD54)、CD105、血管细胞粘附分子(VCAM，即CD106)和活化淋巴细胞粘附分子(ALCAM，即CD166)，表达Ⅰ类组织相容性蛋白HLA-ABC。ADSCs不表达造血细胞表面标志CD14、CD34或CD45，不表达Ⅱ类组织相容性抗原HLA-DR及内皮细胞标志CD31，不表达共刺激因子B7-1（CD80）、B7-2（CD86）和CD40。ADSCs表面标记物会随着培养时间的延长而有所改变。早期原代培养的ADSCs(也称为stromalvascularfraction,SVF)中存在造血干细胞以及内皮祖细胞的标志分子，如：CD11a、CD14、CD45、CD86、HLA-DR。自第2代以后，ADSCs均匀一致地表达间充质干细胞特有标记：CD13、CD29、CD44、CD73、CD90，这可能与原代培养的ADSCs含有多种细胞成分有关[7-8]。人ADSCs不表达MHC2Ⅱ类分子和B7-1（CD80）、B7-2（CD86）和CD40等共刺激分子，这些分子是效应性T细胞激活所必需的，共刺激分子的缺乏，使得T细胞活化的第二信号丧失，导致Th细胞的无反应性而促成免疫耐受，表现出低免疫原性。

2ADSCs向表皮细胞、成纤维细胞分化，促进创面皮肤再上皮化

脂肪干细胞具有定向分化为组织修复所需要的终末分化细胞的能力，为组织修复以及构建组织工程皮肤提供充足的细胞来源。在体外将ADSCs定向诱导分化为表皮细胞的方法较多。雷永红等[9]采用皮肤匀浆液处理ADSCs，单独培养或与热休克损伤的HEKa细胞共培养，诱导rADSCs向表皮细胞定向分化表达CK10、CK14、CK19，其诱导分化效率高于单纯使用表皮生长因子EGF。王先成等[10]利用EGF以及维甲酸等成分诱导ADSCs分化，10天后细胞出现铺路石改变，细胞表达CK19。这与Brzoska等[11]的实验相一致，ADSCs在全反式维甲酸诱导作用下向上皮细胞分化，表达上皮细胞早期的表面标记-角蛋白CK18，不再表达波形蛋白（vimentin）等间充质干细胞标志。Ebrahimian[12]则是将ADSCs在角质细胞条件培养基中培养3周，发现ADSCs向角质形成细胞分化，表达K5和K14。

干细胞在局部微环境的影响下定向诱导分化为创伤部位的靶细胞，该现象称为局部专一分化（site-specificdifferentiation）[13]。在体实验[14-15]以真皮基质或者蚕丝蛋白-壳聚糖支架（SFCS）作为载体，将GFP标记人ADSCs与之形成的复合物移植到裸鼠背部，移植后2周发现GFP-ADSCs分化为成纤维细胞，表达热休克蛋白HSP47；移植后4周GFP-ADSCs分化成表皮细胞，表达CK19。Nie等[16-18]利用脱细胞真皮支架作为载体或者采用创周皮内注射的方式将ADSCs应用于创面，发现ADSCs分化为表皮细胞，表达pan角蛋白、CK5和CK14。

3向血管内皮细胞和平滑肌细胞分化，分泌促进血管生成因子

Cao等[18]利用体外实验，将ADSCs在体外与VEGF共培养时可以表达