《DB34T 4950-2024禽白血病—通用AJ 三重 PCR 检测技术规程》.docx

ICS11.220

34

CCSB41

安徽省地方标准

DB34/T4950—2024

禽白血病—通用/A/J三重PCR检测

技术规程

Technicalregulationforgeneric/A/JtriplePCRdetectionforavianleukemia

2024-09-14发布

2024-10-14实施

安徽省市场监督管理局发布

.

DB34/T4950—2024

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由安徽省动物疫病预防与控制中心提出。

本文件由安徽省农业农村厅归口。

本文件起草单位：安徽省动物疫病预防与控制中心、安徽农业大学动物科技学院、滁州市动物疫病

预防与控制中心、宣城市动物防疫站、宁国市动物卫生监督所。

本文件主要起草人：沈艳、江定丰、郑举、季晶晶、王立、陈芳芳、何长生、程帮照、王维、范亚

楠、王倩、王军、苗文萍、段倩倩、刘畅、陆平、陈曦、周迎春、刘华、陈静、朱良强、伍唯。

I

DB34/T4950—2024

禽白血病-通用/A/J三重PCR检测技术规程

1范围

本文件规定了禽白血病-通用/A/J三重PCR检测方法的主要仪器设备、试剂、引物、反应条件、试验

步骤、结果判定。

本文件适用于禽白血病病毒、A亚群和J亚群的三重PCR检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

Bp：碱基对（basepair）

DNA：脱氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid)

DEPC：焦炭酸二乙酯（diethypyrocarbonate）

PBS：磷酸盐缓冲盐水（phosphatebufferedsaline）

ALV：禽白血病病毒（avianleukemiavirus）

RNA：核糖核酸（ribonucleicacid）

RT-PCR；反转录聚合酶链反应（reversetranscription-polymerasechainreaction）

5主要试剂

本文件所用试剂均为分析纯，所用水应符合GB/T6682中一级水的规格，所有试剂均用无RNase

污染的容器分装。

商品化的RNA提取裂解液。

PBS液，按照附录A.1配制。

TRIzolRNA提取试剂或其他商品化的基因组RNA提取试剂盒。

氯仿。

异丙醇（-20℃预冷）。

1

DB34/T4950—2024

DEPC水：在100mL三蒸水中加入100μLDEPC，18℃～22℃室温下过夜，121℃灭菌15min。也

可用商品化的产品。

75％乙醇：75mL无水乙醇加25mLDEPC水，配置成75％乙醇溶液，-20℃遇冷备用。

商品化的反转录试剂盒。

2×FastTaqpremix：商品化试剂盒。

50×TAE电泳缓冲液，见附录A.2。

1.5％琼脂糖凝胶，见附录A.3。

DNA分子量标准：DL2000Marker,商品化试剂

电泳上样缓冲液：100mL溶液中含0.25g溴酚蓝及40g蔗糖。

引物，引物对序列见附录B.1，加DEPC水制成100μmol/L的储存浓度和10μmol/L的工作浓

度。

阴性对照，健康鸡血液或者组织提取的DNA/RNA。

阳性对照，为A和J亚群禽白血病病毒基因组DNA/RNA。

6仪器和设备

PCR仪。

台式高速冷冻离心机（4℃，离心速度12000r/min以上）。

稳压稳流电泳仪和水平电泳槽。

凝胶成像系统。

可调微量移液器（规格100μL～1000μL、20μL～200μL、1μL～20μL）以及无RNase污染带

滤芯吸头。

组织研磨器。

7样品的采集、运输与保存

按照NY/T541的规定执行。

8实验步骤

样本制备

8.1.1全血、血浆或精液

直接使用。

8.1.2组织样本

取待检组织样本于灭菌的组织研磨中，按质量体积比1：1加入灭菌PBS，充分研磨，制备组织匀

浆，4℃，3000r/min离心15min，取上清液转入无