《朱鹮类志贺邻单胞菌分离与鉴定技术规程》DJG330521T 109-2024.docxVIP

ICS07.100

CCSB05

DJG3305DJG330521/T10921—2024

德清县地方技术性规范

DJG330521/T109—2024

朱鹮类志贺邻单胞菌分离与鉴定技术规程

Codeofpracticeforplesimonasshigelloidesisolationandidentificationfrom

crestedibis

2024-11-01发布 2024-12-01实施

I

德清县市场监督管理局发布

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目次

前言II

TOC\o1-1\h\z\u1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4缩略语 1

5试剂、材料及设备 1

6分离与鉴定流程 2

7分离纯化 2

8生化鉴定 2

916SrRNA基因鉴定 2

10结果判定 3

11废弃物无害化处理和人员安全防护 4

附录A（资料性）培养基制备5附录B（资料性）试剂制备6附录C（资料性）参考序列7

I

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由德清县自然资源和规划局提出并归口。

本文件起草单位：德清县生态林业综合服务中心（德清县湿地和野生动植物保护管理站）、浙江农林大学、湖州市生态林业保护研究中心。

本文件主要起草人：邱国强、杨永春、石坚、宋厚辉、袁李莹、李颖、刘小甜、朱炜、高洪娣、李元春、陈严雪、段润、吴丞昊、牛冬、马翔、徐新泉、陈亦洁、陈梦娇、吴燕芬、陆行舟、刘寒、陆璐彬、耿学进、陈儒欣、高百龙。

II

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朱鹮类志贺邻单胞菌分离与鉴定技术规程

范围

本文件规定了朱鹮类志贺邻单胞菌的分离与鉴定方法。

本文件适用于朱鹮泄殖腔拭子、粪便、肠道内容物等样本中类志贺邻单胞菌的分离和鉴定。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T18652致病性嗜水气单胞菌检验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

SN/T2025动物检疫实验室生物安全操作规范

SN/T2984检验检疫动物病原微生物实验活动生物安全要求细则

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

类志贺邻单胞菌Plesiomonasshigelloides

为革兰氏阴性杆菌，能运动，兼性厌氧，是广泛分布在淡水环境中的细菌，被认为是食物中毒和腹泻的新病原菌。

缩略语

下列缩略语适用于本文件。

PCR:聚合酶链式反应（Polymerasechainreaction）

DNA:脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleicacid）

试剂、材料及设备

5.1试剂及耗材

灭菌蒸馏水（应符合GB/T6682中一级水的规格）、蒸馏水、SS琼脂平板（制备见附录A）、糖和醇类发酵培养基、50×TAE电泳缓冲液（制备见附录B）、1×TAE电泳缓冲液、琼脂糖、10000×GelRed核酸染色剂、Tris、Na2EDTA·2H2O、醋酸、1.5mL离心管、PCR反应管、细菌基因组DNA提取试剂盒。

5.2设备

可调移液器（0.1μL-2.5μL、1μL-10μL、10μL-100μL、100μL-1000μL）、恒温培养箱（37℃）、PCR扩增仪、凝胶电泳仪（150V）、凝胶成像仪、超净操作台、酒精灯、高速离心机（离心力12000g）、电子天平（量程0g-500g，感量0.1g）、冰箱（4℃、-20℃）、高压灭菌锅（115℃、121℃）、光学显微镜。

分离与鉴定流程

类志贺邻单胞菌分离与鉴定流程见图1。

图1类志贺邻单胞菌分离与鉴定流程

分离纯化

将新鲜朱鹮粪便样本分别分区划线于SS