SLC7A11基因表达沉默的肝癌细胞株的构建及筛选.docxVIP

SLC7A11基因表达沉默的肝癌细胞株的构建及筛选

一、实验目的

为了深入研究SLC7A11基因在肝癌发生发展中的作用，我们旨在构建一种SLC7A11基因表达沉默的肝癌细胞株，并通过筛选获得稳定沉默SLC7A11基因的细胞株，为后续肝癌相关研究提供有力的实验模型。

二、实验材料

1.细胞株：人肝癌细胞株HepG2；

2.质粒：pGPU6/GFP/NeoshRNA干扰载体；

3.试剂：Lipofectamine2000、OptiMEM、胎牛血清、DMEM培养基、青霉素链霉素溶液等；

4.仪器：倒置相差显微镜、CO2培养箱、离心机等。

三、实验方法

1.设计并合成针对SLC7A11基因的shRNA序列，将其克隆至pGPU6/GFP/NeoshRNA干扰载体；

2.将重组质粒转染至HepG2细胞，采用G418筛选稳定转染细胞株；

3.通过实时荧光定量PCR和Westernblot方法检测SLC7A11基因在细胞株中的表达情况；

4.对筛选出的稳定沉默SLC7A11基因的细胞株进行扩大培养，备用。

四、实验结果

1.成功构建针对SLC7A11基因的shRNA干扰载体；

2.转染重组质粒的HepG2细胞经G418筛选后，获得稳定沉默SLC7A11基因的细胞株；

3.实时荧光定量PCR和Westernblot结果显示，筛选出的细胞株中SLC7A11基因表达显著降低；