菌液稀释级数确认方案.docVIP

菌液稀释级数确认方案

888888888

8888年88月

目录

目的

适用范围

依据

验证时间

验证小组成员及职责

验证所需要仪器设备、培养基、菌种及关键操作文件

接受标准

测试方法

测试结果

异常情况及处理

结论

再验证周期

1目的

建立菌液稀释级数确认方案，确定含菌量为50～100cfu/ml或10～100cfu/ml时，各试验菌应当稀释的倍数或级数。

2适用范围

2.1本确认方案适用于验证试验或日常工作中涉及的菌种稀释操作。

2.2确认对象为：

50～100cfu/ml：大肠埃希菌MCC(B)44102、金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003、枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501、白色念珠菌霉CMCC(F)98001。

10～100cfu/ml：乙型副伤寒沙门菌CMCC(B)50094。

3依据

《药品GMP》现行版、

《药品GMP指南》国家药监局认证中心编写2011年版

《中国药典》现行版。

《中国药品检验标准操作规程》现行版。

4验证时间

验证方案于2014年月日批准后，整个验证活动应在10个工作日内完成。

5验证小组成员及职责

小组职务

岗位

姓名

责任

组长

化验室主任主任

编制验证方案，编制验证报告；进行验证过程及结论的评价与分析；组织协调实施本验证工作。

组员

QA主管

对编制的方案进行审核

质量部部长

批准再验证方案；评价与分析确认结果；对验证报告进行最终结论。

QA

监督和复核方案实施过程。

微检QC

负责方案的执行。

6验证所需要的仪器设备、培养基、菌种及关键操作文件

6.1验证需用仪器设备

器具名称

规格型号

检定日期

检定单位

有效期

细菌培养箱

霉菌培养箱

高压蒸汽灭菌器

架盘天平

水浴锅

净化工作台〔阳性〕

6.2试验培养基

名称

生产厂家

批号

有效期

营养琼脂培养基

营养肉汤培养基

玫瑰红钠琼脂培养基

改进马丁培养基

改进马丁琼脂培养基

玫瑰红钠琼脂培养基

6.3试验菌种

菌珠名称

来源

购入日期

传代次数

大肠埃希菌

MCC(B)44102

金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003

枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501

白色念珠菌霉CMCC(F)98001

乙型副伤寒沙门菌CMCC(B)50094

6.4验证所需要关键文件及存放地方

关键资料名称

存放地点

《细菌培养箱使用和清洁操作规程》

《霉菌培养箱使用和清洁操作规程》

《高压蒸汽灭菌器使用和清洁操作规程》

《舒筋活血丸质量标准及检验方法》

《微生物限度检查法操作规程》

7接受标准

7.1阴性对照组测试结果应为阴性。

7.2各菌种的菌落形态在不同稀释级的平皿上应固定、一致。

7.3各菌种的菌落数在各稀释级应呈等比线性，除高级稀释未检出菌落外，相邻稀释级的菌落数应呈约10倍关系。

8测试方法

按药典方法制备菌液，取1ml菌液在假设干支含9ml的0.9%无菌氯化钠溶液中，逐级稀释成100、10-1、10-2、……10-8级数的菌悬液。分别取各级1ml，注入平皿，倾倒在琼脂培养，按平皿计数法培养，测定各级菌落数。该试验独立平行进行3次。

8.1菌液制备

8.1.1取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、乙型副伤寒沙门菌的新鲜培养物分别接种至3支10ml营养肉汤培养基中，经32.5℃±2.5℃培养18～24h，备用。

8.1.2取色念珠菌的新鲜培养物至10ml改进马丁培养基中，经25.5℃±2.5℃培养24～48h，备用。

8.2无菌氯化钠溶液的制备

至少准备9ml/支×9支0.9%的无菌氯化钠溶液。

8.3稀释

8.3.1分别取1ml菌液〔金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、乙型副伤寒沙门菌、白色念珠菌〕在1支含9ml0.9%的无菌氯化钠溶液中，用吸管吹打约10下，即成10-1级，吸取该管菌液1ml至下支含9ml0.9%的无菌氯化钠溶液中，用刻度管吹打约10下，即成10-2级，依次，逐级稀释直至10-8级数，每递增一个稀释级，必须换一个吸管。

8.4注皿

分别吸取上述各菌各级菌悬液1ml于平皿中，平行制备2个皿，金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、乙型副伤寒沙门菌倾倒约15ml的营养琼脂培养基，白色念珠菌倾倒玫瑰红钠琼脂培养基。按《微生物限度检查法操作规程》中的平皿法，培养，测定各皿各菌菌落数。

9测试结果：见附表1、2、3。

10异常情况及处理：

质量负责人：验证小组组长：QA：

11结论

11.1按照本确认方案，确定了各菌到达规定含菌量时的稀释级别。

菌