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第四章RNA遗传和蛋白质遗传RNA遗传：RNA干扰(RNAinterference,RNAi)其它小RNA(smallRNA)蛋白质遗传朊病毒(prion)第一节RNA干扰

（RNAinterference，RNAi）RNA干扰(RNA干涉)是与靶基因序列同源的双链RNA所诱导的一种特异性的转录后基因沉默现象.它是一种跨越多种种属的古老的生物途径,同时它的出现为生物学家提供了一种快速、简便的反向遗传学技术,在后基因组时代基因功能的研究中具有重要的应用前景.2002年Science杂志十大科学发现之首（一）RNAi的发现1990年,为加深矮牵牛花(petunias)的紫色,Jorgensen等导入了一个强启动子控制的色素基因。结果许多花瓣颜色并未加深,反而呈杂色甚至白色。这是由于转基因和同源的内源基因的表达都被抑制了，Jorgensen把这个现象命名为共抑制(cosuppression)。后来发现在其他许多植物中，甚至在真菌中也有类似的现象。矮牵牛花中的色素基因共抑制现象随后几年,另外几个植物学家也发现了类似的现象。如Santa等,将番茄病毒Ｘ复制所需的复制酶基因导入烟草中,以阻断病毒的生活周期而控制病毒的生长,但有些烟草表现出抗病毒的特性,而另外一些则相反。随后,在植物病毒实验中也观察到共抑制现象,并发现共抑制具有抗病毒功能。Quelling现象并非只有植物学家才注意到了这种意外的现象。意大利的Cogoni等,将外源类胡萝卜素基因导入链孢霉(Neurosporacrassa),结果转化细胞中内源性的类胡萝卜素基因也受到了抑制。而在真菌转基因实验中这种共抑制现象被称为“quelling”。首次发现dsRNA能够导致基因沉默的线索来源于线虫Caenorhabditiselegans的研究。1995年，康乃尔大学的研究人员SuGuo(郭苏）和Kemphues尝试用反义RNA去阻断par-1基因的表达以探讨该基因的功能，结果反义RNA的确能够阻断par-1基因的表达，但是注入正义链RNA作为对照，也同样阻断了基因的表达。他们发现SuGuo博士遇到的正义RNA抑制基因表达的现象，以及过去的反义RNA技术对基因表达的阻断，都是由于体外转录所得RNA中污染了微量双链RNA而引起。当他们将体外转录得到的单链RNA纯化后注射线虫时发现，基因抑制效应变得十分微弱，而经过纯化的双链RNA却正好相反，能够高效特异性阻断相应基因的表达，其抑制基因表达的效率比纯化后的反义RNA至少高2个数量级。该小组将这一现象称为RNA干扰。RNAi现象的普遍性随后陆续发现RNAi也存在于水稻、烟草、果蝇、小鼠及人等几乎所有的真核生物中。RNAi能高效特异的阻断基因的表达，在线虫，果蝇体内，RNAi能达到基因敲除的效果。ＲＮＡｉ潜在的作用促使Fｉｒｅ和Ｔｉｍｍｏｎｓ继续实验,将一种能够表达与ｕｎｃ22基因同源的双链ＲＮＡ的基因工程细菌喂食线虫,结果线虫表现出类似ｕｎｃ22缺陷的表型。ＴｉｍｍｏｎｓＬ，ＦｉｒｅＡ，1998Ｎａｔｕｒｅ，395：854后继的实验表明将线虫浸入双链ＲＮＡ中同样可以诱导基因沉默———这种技术使得大规模筛选线虫ＲＮＡｉ诱导的功能缺失突变体成为可能,并引发后继的大量针对这种模式生物基因敲除的研究ＴａｂａｒａＨ，ＧｒｉｓｈｏｋＡ，ＭｅｌｌｏＣＣ1998．Ｓｃｉｅｎｃｅ，282：430～431涡虫(Ｐｌａｎａｒｉａｎ)Ｓａｎｃｈｅｚ＿ＡｌｖａｒａｄｏＡ，ＮｅｗｍａｒｋＰＡ，1999．ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ，96：504～5054水螅(ｈｙｄｒａ)ＬｏｈｍａｎｎＪＵ，ＥｎｄｌＩ，ＢｏｓｃｈＴＣ，1999．ＤｅｖＢｉｏｌ，214：211～214锥虫(ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍｅｓ)ＮｇｏＨ，ＴｓｃｈｕｄｉＣ，ＧｕｌｌＫ，ＵｌｌｕＥ，1998．ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ，95：14687～14692、真菌(ｆｕｎｇｉ）（neurosporacrassa)ＣｏｇｏｎｉＧ，ＭａｃｉｎｏＧ，1999．Ｎａｔｕｒｅ，339：166～169在果蝇(Drosophila)中发现ＲＮＡiBersteinEetalNature2001,409(6818):363-366在拟南芥中发现ＲＮＡiWassnenggerMetalplantMolBiol1998,37(2):349-362在小鼠中发现ＲＮＡiWiannyFet