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RP—HPLC测定三七拟青霉胶囊中腺苷的含量

目的建立测定三七拟青霉胶囊中腺苷含量的方法。方法采用反相高效液相

色谱法（RP-HPLC），色谱柱为PhenomenexGeminiC18（250mm×4.6mm，5?m），

流动相为pH6.5磷酸盐缓冲液（0.01mol/L磷酸二氢钠68.5mL与0.01mol/L磷

酸氢二钠31.5mL混合）-甲醇（85∶15），流速为1.0mL/min，进样量为5?L，

检测波长为260nm，柱温为室温。结果腺苷在0.05～0.24?g范围内呈良好的线

性关系（r=0.99999），加样回收率为98.18%，RSD=1.35%。结论本法操作简便，

结果可靠，适用于三七拟青霉胶囊的质量控制。

标签：三七拟青霉胶囊；腺苷；高效液相色谱法；含量测定

三七拟青霉胶囊是以三七粉、蝙蝠蛾头孢菌粉、茶多酚和银杏叶提取物为原

料制备而成的胶囊制剂，有缓解体力疲劳和提高缺氧耐受力等功效。腺苷是本品

主要原料蝙蝠蛾头孢菌粉的关键指标成分，其含量测定方法有纸层析-分光光度

法[1]、薄层扫描法[2]和高效液相色谱法[3-4]等。本研究参考冬虫夏草项下的高

效液相色谱条件[3]，建立三七拟青霉胶囊中腺苷的含量测定方法，为制定三七

拟青霉胶囊质量标准提供参考。

1仪器与试药

Agilent1100型高效液相色谱仪，包括G1322A真空脱气机、G1311A四元泵、

G1313A自动进样阀、G1316A柱温控制器、G1315A检测器（美国安捷伦科技公

司）。

腺苷对照品（批号879-200001，供含量测定用）购自中国药品生物制品检定

所。三七拟青霉胶囊（批号090501、090502、090503），上海新康制药厂自制。

甲醇为色谱纯，乙醇、正丁醇为分析纯。D101大孔吸附树脂（天津农药厂）。

2方法与结果

2.1色谱条件与系统适用性试验

色谱柱为PhenomenexGeminiC18（250mm×4.6mm，5?m），流动相为pH6.5

磷酸盐缓冲液（0.01mol/L磷酸二氢钠68.5mL与0.01mol/L磷酸氢二钠31.5mL

混合）-甲醇（85∶15），流速为1.0mL/min，进样量为5?L，检测波长为260nm，

柱温为室温。理论塔板数按腺苷峰计算应不低于2000，腺苷峰与前后峰的分离

度均大于1.5。

2.2对照品溶液的制备

精密称取腺苷对照品6.12mg，置25mL量瓶中，加50%乙醇溶解并稀释至

刻度，摇匀。精密量取此溶液5mL，置25mL量瓶中，加50%乙醇稀释至刻度，

摇匀，即得48.96?g/mL对照品储备溶液。精密量取上述储备溶液1mL，置2mL

量瓶中，加50%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得24.48?g/mL对照品溶液。

2.3供试品溶液的制备

取装量差异项下的本品内容物，混匀，取约2.0g，精密称定，置具塞锥形

瓶中，精密加入50%乙醇溶液50mL，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，

频率33kHz）30min，取出，放冷，再称定重量，用50%乙醇溶液补足减失的重

量，摇匀静置，过滤，精密量取续滤液10mL，蒸干，加适量热水溶解，上5mL

D101大孔吸附树脂柱（内径0.8cm），用100mL蒸馏水洗脱，洗脱液60℃以

下减压蒸干，残渣用适量50%乙醇溶解，转移至5mL量瓶中，加50%乙醇至刻

度，摇匀，用微孔滤膜（孔径0.45?m）滤过，即得供试品溶液。

2.4阴性样品溶液的制备

按处方比例配制除蝙蝠蛾头孢菌粉以外其余药味的阴性样品，按“2.3”项下

方法制备阴性样品溶液。

2.5阴性样品试验

分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液，按“2.1”项下色谱条件进

样，测定。结果表明，阴性样品对腺苷的含量测定无干扰，色谱图见图1。

2.6线性关系的考察

2.7精密度试验

取“2.2”项下对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样，重复进样6次，测定

峰面积，RSD=0.32%。

2.8重复性试验

取同一批样品（批号090501）6份，按“2.3”项下方法制备