高效液相色谱法.pptVIP

3.分离系统——色谱柱色谱柱是液相色谱的心脏部件，它包括柱管与固定相两部分。柱管材料有玻璃、不锈钢、铝、铜及内衬光滑的聚合材料的其他金属。玻璃管耐压有限，故金属管用得较多。一般色谱柱长5～30cm，内径为4～5mm，凝胶色谱柱内径3～12mm，制备往内径较大，可达25mm以上。一般在分离前备有一个前置柱，前置柱内填充物和分离柱完全一样，这样可使淋洗溶剂由于经过前置柱为其中的固定相饱和，使它在流过分离柱时不再洗脱其中固定相，保证分离技的性能不受影响常用分离柱柱体为直型不锈钢管，见下图柱子装填得好坏对柱效影响很大。对于细粒度的填料（＜20μm）一般采用匀浆填充法装柱，先将填料调成匀浆，然后在高压泵作用下，快速将其压入装有洗脱液的色谱柱内，经冲洗后，即可备用。4．检测系统在液相色谱中，有两种基本类型的检测器。一类是溶质性检测器，它仅对被分离组分的物理或化学特性有响应，属于这类检测器的有紫外、荧光、电化学检测器等。另一类是总体检测器，它对试样和洗脱液总的物理或化学性质有响应，属于这类检测器的有示差折光，电导检测器等。现将常用的检测器介绍如下:（l）紫外检测器（2）荧光检测器（3）电导检测器（4）附属系统它包括脱气、梯度淋洗、恒温、自动进样、馏分收集以及数据处理等装置。其中梯度淋洗装置是高压液相色谱仪中尤为重要的附属装置.（一）检测器(detector)的主要性能要求：灵敏度（sensitivity）高（检测限低）噪音（noise）低线性范围（linearrange）宽重复性（repeatability）好适用范围广（通用型、专属型）（二）紫外检测器(ultravioletdetector)检测原理：朗伯－比尔(Lambert-Beer)定律，响应信号（吸光度）与浓度成正比A=εCl特点：灵敏度较高（10-6—10-9g/ml），噪音低，线性范围宽，稳定性好，适于梯度，不破坏样品，应用广（分析、制备）。局限：只能检测有紫外吸收的物质，流动相的截止波长应小于检测波长。专属型、浓度型检测器1.紫外检测器应用最广，对大部分有机化合物有响应。特点：灵敏度高；线形范围高；流通池可做的很小（1mm×10mm，容积8μL）；对流动相的流速和温度变化不敏感；波长可选，易于操作；可用于梯度洗脱。紫外检测器固定波长检测器：254nm可变波长检测器：光源：氘灯（和钨灯），200—400（800）nm，单色器，流通池（试样），光电管光路系统和紫外分光光度计相似光电二极管阵列检测器(photodiodearraydetector；PDAD)：一系列光电二极管，一个二极管对应接受光谱上约1nm谱带宽的单色光紫外检测器光电二极管阵列检测器工作原理：复光通过流通池，再进入单色器，分光后照射在二极管阵列装置上，同时获得各波长的信号强度，即获得组分的吸收光谱。获得三维光谱－色谱图。用途：吸收光谱用于组分的定性，色谱峰面积用于定量,判断峰纯度。1a.紫外光电二极管阵列检测器紫外检测器的重要进展:光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。光电二极管阵列检测器紫外检测器紫外普通检测器和光电二极管阵列检测器的比较普通检测器光电二极管阵列检测器（三）荧光检测器

(fluorescencedetector；FD)检测原理：化合物受紫外光激发后，发射出比激发光波长更长的光，称为荧光；荧光强度(F)与激发光强度(I0)及荧光物质浓度(C)之间的关系为：F=2.3QKI0εCl Q为量子产率，K为荧光效率，ε为摩尔吸光系数，l为光径长度。F=KC荧光检测器(fluorescencedetector；FD)特点：选择性好，专属型检测器灵敏度比紫外检测器高（检测限10-10g/ml）激发波长(?ex)和发射波长(?em)的选择2.荧光检测器

（fluorescencedetector）高灵敏度、高选择性对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应.第一节高效液相色谱法的主要类型固定相和流动相及其选择一、HPLC的主要类型 四类基本类型色谱法分配色谱法（part