一种交联固定化双酶-表面活性剂复合物及其制备方法 .pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN109536479A

(43)申请公布日2019.03.29

(21)申请号CN201811478261.9

(22)申请日2018.12.05

(71)申请人清华大学

地址100084北京市海淀区清华园1号

(72)发明人戈钧曹逊黎晓阳熊佳容

(74)专利代理机构北京精金石知识产权代理有限公司

代理人张黎

(51)Int.CI

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

一种交联固定化双酶-表面活性剂复

合物及其制备方法

(57)摘要

本发明属于生物技术领域，提供一

种交联固定化双酶‑表面活性剂复合物，

通过表面活性剂对葡萄糖氧化酶和过氧化

氢酶的双酶体系进行修饰，再经沉淀、交

联等反应过程合成得到。经过表面活性剂

修饰的双酶体系，大大增加了交联聚集体

在反应介质中的分散性，保证其不易出现

团聚现象，并具有良好的热稳定性。此

外，本发明提供的交联固定化双酶‑表面

活性剂复合物无需低温操作，室温下即可

合成，大大降低了实验成本，使用后通过

简单的离心分离可回收再利用，经过多次

重复利用后酶活仍能保持较高的活力。

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

权利要求说明书

1.一种交联固定化双酶-表面活性剂复合物，其特征在于，由葡萄糖氧化酶和过氧

化氢酶先经表面活性剂修饰后，再交联聚集得到。

2.根据权利要求1所述的交联固定化双酶-表面活性剂复合物，其特征在于，所述

葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶经表面活性剂修饰后，经沉淀剂沉淀，再经交联剂、赖

氨酸交联聚集得到。

3.根据权利要求2所述的交联固定化双酶-表面活性剂复合物，其特征在于，所述

表面活性剂选自ImageF-127、ImageF-68、ImageL-81、ImageL-31、P-

123、吐温-20、吐温-40、吐温-60、吐温-80、司盘-20、司盘-60、司盘-80、十六烷

基三甲基溴化铵、聚乙烯吡咯烷酮、十二烷基苯磺酸钠、十二烷基硫酸钠、月桂醇

硫酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、聚乙二醇辛基苯基醚、月桂酰胺丙基甜菜碱中

的一种或多种。

4.根据权利要求2所述的交联固定化双酶-表面活性剂复合物，其特征在于，所述

葡萄糖氧化酶的蛋白浓度为1-80mg/mL，过氧化氢酶的蛋白浓度为1-80mg/mL，

表面活性剂的含量为1-800mg/mL。

5.根据权利要求2所述的交联固定化双酶-表面活性剂复合物，其特征在于，所述

沉淀剂选自硫酸铵、硫酸钠、氯化钠中的一种或多种。

6.根据权利要求2所述的交联固定化双酶-表面活性剂复合物，其特征在于，所述

交联剂为戊二醛，浓度为30-65％(V/V)，添加量为葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶溶液

体积的1/40-1/10倍。

7.根据权利要求2所述的交联固定化双酶-表面活性剂复合物，其特征在于，所述

赖氨酸的浓度为0.5-1.5mol/L，添加量为修饰后的双酶溶液体积的1/40-1/25倍。

Claim8.一种权利要求1-7任一项所述交联固定化双酶-表面活性剂复合物的制备

方法，包括以下步骤：

(1)修饰双酶体系：葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶中加入表面活性剂进行修饰；

(2)交联反应：向修饰后的双酶体系中加沉淀剂沉淀，然后加入交联剂进行交联，

最后加入赖氨酸，备用；

(3)离心、洗涤、干燥，即得。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中在修饰后的双酶溶

液里加入沉淀剂，搅拌10min-4h后加入沉淀剂，搅拌30min-24h后，加入赖氨酸

溶液，继续搅拌30min-24h。

10.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)的离心转速为4000-

15000rpm，离心时间为3-30min；所述干燥方式选自冷冻干燥、真空干燥、自然风

干中的一种。