木质素酶活测定方法.docVIP

115木质素酶活测定方法

仪器:多功能紫外可见光分光光度计(CEMultimodecomputingUVSpectrophotometer(6000Series))。1ml比色皿。反应试剂:按测定反应液体总量1mL,酶粗液样用量100～200Ll;反应缓冲溶液为pH2.75磷酸二氢钾缓冲溶液;藜芦醇:按缓冲溶液的5%(V?V)加入到20mM藜芦醇溶液中。使用20Ll20mMH2O2溶液启动反应,于310mM测吸光率的变化。按吸光率计算藜芦醛产量。酶活单位定义:每分钟氧化生成1Lmol藜芦醛所需的酶量。

1.2.5

1.2.5.1漆酶(愈创木酚法,朱显峰改良)10mL反应体系中,含50mmol·L-1琥珀酸钠缓冲溶液(pH值4.5),0.4mmol·L-1的愈创木酚和0.5mL的酶液,30℃条件下反应30min后,于465nm处测OD值.酶活力定义为:以灭活的酶液反应混合物做对照,1min内催化氧化1nmoL愈创木酚的酶量为

1.2.5.2木质素过氧化物酶(藜芦醇法)藜芦醇2mmol·L-1,酒石酸缓冲液50mmol·L-1(pH值2.5),0.4mmol·L-1的H2O2,室温条件下测定,于310nm紫外光处测OD值.酶活力定义为:每min合成1μmol藜芦醛所需的酶量为1U[5,9].

1.2.5.3锰依赖过氧化物酶反应体系中含50mmol·L-1的乳酸钠缓冲液(pH值4.5)3.4mL,1.6mmol·L-1的硫酸锰溶液0.1mL,1.6mmol的H2O20.1mL启动反应.室温条件下测240nm紫外光处反应4min时OD改变值.酶活力定义为:每min使1μmol·L-1Mn2+转化为Mn3+所需的酶量为1U[4,8].