用作畜禽疫苗佐剂的CpG DNA基因工程重组体 .pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN1554751A

(43)申请公布日2004.12.15

(21)申请号CN200310106226.1

(22)申请日2003.11.07

(71)申请人深圳市未来海洋科技发展有限公司

地址210096广东省深圳市中心区福中一路江苏大厦30楼45号信箱

(72)发明人李光富朱鸿飞

(74)专利代理机构南京经纬专利商标代理有限公司

代理人王之梓

(51)Int.CI

C12N15/11

C12P19/34

A61K39/39

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

用作畜禽疫苗佐剂的CpGDNA基

因工程重组体

(57)摘要

本发明公开了一种能促进畜禽疫苗

效价的用作畜禽疫苗佐剂的CpGDNA的

基因工程重组体，该基因工程重组体是根

据由序列为：5’－

GGTGCATCGATGCAGGGGGG－3’、5’－

GGTGCGTCGATGCAGGGGGG－3’及5－

TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT－3’串

联而成的D19D282006目的片段DNA的序

列，合成其寡核苷酸正链和负链合成其寡

核苷酸正链和负链，在合成的寡核苷酸末

端加上能与线形载体末端相匹配的碱基序

列，然后将此寡核苷酸片段、退火缓冲

液、及无菌重蒸水混合后，于90℃～

100℃水浴中孵浴3分钟以上，自然冷却至

室温，形成含D19D282006序列的DNA片

段，此后将此DNA片段插入线性载体的相

应的酶切位点，最后，将其转化感受态大

肠杆菌而得到的基因工程重组体。本发明

能提高CpG佐剂的效能，生产工艺简单，

成本低廉，适合于大规模工业化生产。极

大地降低了CpGODN的生产成本。

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

权利要求说明书

1、一种能促进畜禽疫苗效价的用作畜禽疫苗佐剂的CpGDNA的基因工程重组体，

其特征在于：该基因工程重组体是根据由序列为：

5’GGTGCATCGATGCAGGGGGG3’、

5’GGTGCGTCGATGCAGGGGGG3’及

5’TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT3’串联而成的D19D282006目

的片段DNA的序列，合成其寡核苷酸正链和负链，在合成的寡核苷酸末端加上能

与线形载体末端相匹配的碱基序列，然后将此寡核苷酸片段、退火缓冲液、及无菌

重蒸水混合后，于90℃～100℃水浴中孵浴3分钟以上，自然冷却至室温，形成含

D19D282006序列的DNA片段，此后将此DNA片段插入线性载体的相应的酶切位

点，最后，将其转化感受态大肠杆菌而得到的基因工程重组体。

2、根据权利要求1所述的用作畜禽疫苗佐剂的CpGDNA基因工程重组体，其特

征在于寡核苷酸包括第一片段的寡核苷酸，该第一片段的寡核苷酸正链碱基序列为

5’

GGTGCuATCGAT/uGCAGGGGGGTCuGTCGTT/uTTuGTCGTT/uT

TuGTCGTT/uGGTGCuGTCGAT/uGCAGGGGGGA3’

负链碱基序列为

5’

CCCCCCTGCATCGACGCACCAACGACAAAACGACAAAACGACGACCCCCCTG

CATCGATGCACCA3’，

退火后形成的DNA片段的两端含有突出的碱基A，线形载体为线