蛋白质分子量测定方法的比较.docVIP

蛋白质分子量测定方法的比拟

梁永达

〔复旦大学药学院，上海〕

摘要：分子量是蛋白质主要的特征参数之一，近年来其测试方法开展十分迅速。该文概述了目前蛋白质分子量测定中最常用的几种方法，包括粘度法、凝胶过滤层析法、凝胶渗透色谱法、SDS-凝胶电泳法、渗透压法、电喷雾离子化质谱技术、基质辅助激光解吸电离质谱技术、光散射法、超速离心沉降法，并比拟了这几种方法的优缺点。

关键词：蛋白质分子量粘度法凝胶过滤层析法凝胶渗透色谱法SDS-凝胶电泳法渗透压法电喷雾离子化质谱技术基质辅助激光解吸电离质谱技术光散射法超速离心沉降法

Comparisonofthemethodsofmolecularweightdeterminationofproteins

LiangYongda

(SchoolofPharmacyinFudanUniversity,Shanghai)

Abstract:Molecularweightisoneofthemostimportantcharacteristicparametersofproteins，whichleadsthemethodstodetermineproteinmolecularweighttodeveloperapidlyinrecentyears.Inthispaper，themechanismandapplicationarebrieflyoverviewedforthemostwidelyusedtechnologiesincludingviscositymethod,gelfiltrationchromatography,gelpermeationchromatography,SDS-gelelectrophoresis,osmoticpressuremethod,electrosprayionizationmassspectrometry,matrix-assistedlaserdesorptionionizationmassspectrometry,lightscattering,ultracentrifugationsedimentation.Plus,wecomparethesemethods’advantagesanddisadvantages.

Keywords:molecularweightdeterminationofproteins,viscositymethod,gelfiltrationchromatography,gelpermeationchromatography,SDS-gelelectrophoresis,osmoticpressuremethod,electrosprayionizationmassspectrometry,matrix-assistedlaserdesorptionionizationmassspectrometry,lightscattering,ultracentrifugationsedimentation

分子量是蛋白质的主要特征参数之一，当发现一种新的蛋白质时，首先应准确测定其分子量。蛋白质分子量的测定方法有多种，以下将对实验室最常用的几种方法进行介绍：

粘度法

一定温度条件下，高聚物稀溶液的粘度与其分子量之间呈正相关性，随着分子量的增大，聚合物溶液的粘度增大。通过测定高聚物稀溶液粘度随浓度的变化，即可计算出其平均分子量(粘均分子量)。

如果高聚物分子的分子量愈大，那么它与溶剂间的接触外表也愈大，摩擦就大，表现出的特性粘度也大。特性粘度和分子量之间的经验关系式为：

式中，M为粘均分子量；K为比例常数；?是与分子形状有关的经验参数。K和?值与温度、聚合物、溶剂性质有关，也和分子量大小有关。K值受温度的影响较明显，而?值主要取决于高分子线团在某温度下，某溶剂中舒展的程度，其数值解在0.5～1之间。K与?的数值可通过其他绝对方法确定，例如渗透压法、光散射法等，从粘度法只能测定[η]。

在无限稀释条件下

获得[η]的方法有二种：一种是以ηsp/C对C作图，外推到C→0的截距值；另一种是以lnηr/C对C作图，也外推到C→0的截距，两根线会合于一点。方程为：

覃志英.粘度法测定分子量.河池师专学报一九八七年第一期

覃志英.粘度法测定分子量.河池师专学报一九八七年第一期

优缺点：该方法操作简单、设备价格较低，通常不需要标准样品，但无法测定聚合物的分子量分布。

凝胶过滤层析