临床检验基本技能—涂片染色技术（临床检验技术）.pptx

革兰染色

细菌受色原理等电点学说：革兰阳性菌的等电点（PI2-3)比革兰阴性菌等电点(PI4-5)低，在同一PH条件下，阳性菌比阴性菌所带负电荷要多，与带正电荷的碱性染料结合力牢固，不易脱色

细菌染色操作【器材及试剂的准备】1.细菌标本2.接种环、酒精灯3.载玻片4.滤纸5.革兰染液：结晶紫溶液、革兰碘液、95%乙醇（脱色液）、稀释石炭酸复红

细菌染色操作

1.准备工作（1）细菌涂片制作：取清洁无油载玻片一张，在其中央滴加一滴生理盐水，将接种环用火焰烧红灭菌，待冷却后自固体培养基或琼脂斜面上菌落挑取细菌少许混于生理盐水中，轻轻涂抹制成直径约1cm大小的薄层，然后将接种环用火焰烧红灭菌。涂片置室温自然干燥，干燥后，标本面向上，用钟摆样速度来回通过火焰三次，使细菌杀死并固定于玻片上。

1.准备工作

2.染色过程（1）用蜡笔在细菌涂片两端画线，以防染液溢出，然后将细菌涂片平放在染色架上。（2）初染：先加结晶紫染液数滴，以覆盖整个菌膜为宜，染色1min。（3）用细流水自涂面上端向下轻轻冲去染液（切勿直接冲在标本上面）（4）媒染：滴加革兰碘液，覆盖整个菌膜，作用1-3分钟。

2.染色过程（5）用细流水自涂面上端向下轻轻冲去染液（切勿直接冲在标本上面）（6）脱色：滴加95%乙醇在菌膜上，并频频摇动玻片，至无紫色脱出为止（约20秒）。（7）用细流水自涂面上端向下轻轻冲去染液（切勿直接冲在标本上面）

2.染色过程（8）复染：加稀释石炭酸复红染液，覆盖整个菌膜，半分钟。（9）用细流水自涂面上端向下轻轻冲去染液（切勿直接冲在标本上面）（10）用滤纸吸干细菌涂片上水分

2.染色过程

思考题为什么有些细菌革兰染色会染成蓝色，有些会染成红色？革兰阳性菌和革兰阴性菌的判断对于临床治疗有何意义？

抗酸染色

原理分枝杆菌细胞壁含脂质较多,其中主要成分为分枝菌酸,此物具有抗酸性,染色时与石炭酸复红结合牢固,能抵抗酸性乙醇的脱色作用,因此抗酸菌能保持复红的颜色,达到染色目的。

结核培养特性小结馋--专性需氧，营养要求高最适生长温度为35～37℃，pH6．5～6．8。懒--生长缓慢，18h-20H分裂1次，在固体培养基上2～8w才出现肉眼可见的菌落。丑--典型菌落为粗糙型，表面干燥呈颗粒状，不透明，乳白色或淡黄色，如菜花样。

结核杆菌菌落

涂片染色步骤

抗酸染色阳性菌石炭酸复红（初染）3%盐酸酒精（脱色）亚甲蓝（复染）干燥油镜下观察5分钟烤干至无色褪下水洗烤干1分钟烤干

抗酸阳性菌

抗酸阳性菌

抗酸阳性菌

萋-尼抗酸染色镜检结果分级报告标准：仔细查遍整张涂片或连续观察约300个，时间不少于4分钟，根据检查出的细菌数量来报告：检出抗酸杆菌（+~4+）报告方式镜检结果P173萋尼抗酸染色镜检结果-仔细检查300个视野未发现抗酸杆菌+/-300个视野内发现1-2条抗酸菌+100个视野内发现1-9条抗酸菌2+10个视野内发现1-9条抗酸菌3+每个视野内发现1-9条抗酸菌4+每个视野内发现9条以上抗酸菌

思考题抗酸阳性菌是否就是结核分枝杆菌？抗酸染色过程为何要加热？

瑞氏染色

染色原理将一小滴血液均匀涂在玻片上，呈单层紧密分布，制成薄血片。用含天青B和伊红的瑞氏染液进行染色。细胞中的碱性物质会与酸性染料伊红结合成红色；细胞中的酸性物质会与碱性染料亚甲兰结合染成蓝色；在中性颗粒与伊红和亚甲兰均可结合，染成淡紫红色。

染色原理瑞氏染液亚甲兰+++伊红----碱性物质(Hb、嗜酸性颗粒)+++++酸性物质(淋巴细胞胞质嗜碱性颗粒)---------中性物质(中性颗粒)±±±±

染色器材载玻片、推片、吸耳球、显微镜、酒精灯、采血针和EDTA-K2真空管试剂：瑞氏染液标本：EDTA-K2抗凝血Ⅰ液染液Ⅱ液磷酸盐缓冲液（PH）

血压片的制备良好的血涂片1.厚薄适宜2.头体尾要明显3.细胞分要均匀4.血膜边缘要整齐5.留有一定空隙

fastslow血压片的制备

血压片的制备

染色过程操作：1.静脉采血2.制作血涂片3.干燥涂片4.标记涂片5.染色6.观察结果

1.将玻片平置于染色架上2.滴加染液Ⅰ液3-5滴，迅速盖满血涂片，0.5-1.0分钟3.滴加Ⅱ液(等量或稍多)4.用吸耳球吸匀，让两种液体充分混合，5-10分5.用流水冲去染液，待干染色过程

染色结果

注意事项1.瑞氏染液：要放置时间长，染液成熟。2.采血：不能使用肝素抗凝标本玻片必须清洁干燥无尘使用玻片只能手持玻片边缘。3.制作涂片：角度、速度、血量4.干燥涂片：一定要干透后才可染色5.染色：染液要适量，冲洗时不能先倒掉染液，应以流水一起冲洗，时间不能过久，冲洗完的