免疫学技术 免疫细胞的分离纯化（临床免疫检验）.pptx

免疫细胞的分离与纯化

免疫细胞在人体中担任着十分重要的角色，各种免疫细胞是完成免疫应答及其调控的基础。因此，将免疫细胞从混合细胞群体中分离出来对于了解其在免疫应答中的作用及相互关系有着重要意义前言

免疫细胞的分离纯化指参与免疫应答或与免疫应答相关的细胞主要包括淋巴细胞、单核-巨噬细胞和树突状细胞等通过分离、纯化免疫细胞及其亚群并对其数量和功能测定，可以判断机体免疫功能状态对指导临床实践和科学研究具有重要意义免疫细胞

白细胞分离自然情况下红细胞的沉降速度快于白细胞从而达到分离白细胞的目的某些高分子聚合物（如明胶、右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮等）可使红细胞凝集呈串钱状，加速红细胞沉降使之更易与白细胞分离自然沉降法高分子聚合物沉降法

外周血单个核细胞分离外周血单个核细胞（PBMC）：主要是指淋巴细胞和单核细胞常用分离液：Ficoll液和Percoll液分离人外周血中各类血细胞密度表细胞种类相对密度红细胞1.093白细胞1.092血小板1.030~1.035淋巴细胞和单核细胞1.075~1.090

Ficoll分离法注意温度以20℃最适宜，超过25℃影响细胞得率

Percoll分离法连续密度梯度分离液（Percoll液+PBS，离心）加入PBMC悬液或抗凝全血1000×g离心20min

淋巴细胞的纯化1.黏附法用于去除单核细胞2.羧基铁吞噬法磁铁吸引羧基铁原理3.苯丙氨酸甲酯去除法苯丙氨酸甲酯具有亲溶酶体性质1.多次洗涤离心法2-3次离心、洗涤去除大部分血小板2.胎牛血清梯度离心法适用于外周血中血小板异常增多的情况1.低渗裂解法不同细胞对渗透压的渗透脆性不同2.氯化铵裂解法在PBMC悬液中加入适量0.83%氯化铵去除血小板去除单核细胞去除红细胞

淋巴细胞亚群的分离PBMC悬液与SRBC混合Ficoll法密度梯度离心收集管底细胞并低渗裂解E花环沉降法：主要用于T细胞的分离

淋巴细胞亚群的分离PBMC悬液加入尼龙棉柱37℃中静置1～2小时获得T细胞获得B细胞预热的含小牛血清培养液洗脱冷培养液边冲洗边挤压尼龙棉分离法可分离T细胞和B细胞

淋巴细胞亚群的分离免疫磁珠分离法

淋巴细胞亚群的分离流式细胞术分离法是目前比较先进的细胞分离手段和方法

吞噬细胞的分离单核细胞分离巨噬细胞分离中性粒细胞分离Percoll密度梯度分离法流式细胞术分离法免疫磁珠分离法黏附法斑蝥敷贴法腹腔渗出液分离法右旋糖酐沉降法

0102030405白细胞分离外周血单个核细胞分离淋巴细胞纯化淋巴细胞亚群分离吞噬细胞的分离小结

思考题BC1.为什么常用相对密度为1.077±0.001的Ficoll分层液分离外周血单个核细胞？2.淋巴细胞亚群的分离方法有哪些？