基因工程的基本操作程序导学案 高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3.docxVIP

高二生物学案3.2.2DNA片段的扩增及电泳鉴定

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3.2.2DNA片段的扩增及电泳鉴定

【学习目标】

1.了解PCR和电泳鉴定的基本原理。2.尝试进行PCR的基本操作并用电泳鉴定PCR的产物。

【自主预习】

一、实验原理

1．DNA片段的扩增

PCR利用了原理，通过来控制DNA双链的。

2．琼脂糖凝胶电泳

(1)带电粒子：DNA分子具有，在一定的pH下，这些基团可以带上。

(2)迁移动力与方向：在的作用下，带电分子会向着与它所带电荷的电极移动，这个过程就是电泳。

(3)迁移速率：在凝胶中DNA分子的迁移速率与、有关。

(4)检测：凝胶中的DNA分子通过染色，可以在波长为下被检测出来。

二、方法步骤

1．移液：用按照配方或PCR试剂盒的说明书，在微量离心管中依次加入。

2．：待所有的组分都加入后，盖严离心管的盖子。

3．离心：将微量离心管放在离心机上，离心约，使反应液集中在管的。

4．反应：将装有反应液的微量离心管放入中，设置程序进行反应。

5．根据待分离的DNA片段的大小，用配制琼脂糖溶液，一般配制质量分数为的琼脂糖溶液，并加入混匀。

6．将扩增得到的PCR产物与(内含指示剂)混合，再用微量移液器将混合液缓慢注入凝胶的加样孔内。

7．接通电源，根据电泳槽阳极至阴极之间的距离来设定电压，一般为。待指示剂前沿迁移接近时，停止电泳。

8．电泳结束后，取出凝胶置于下观察和照相。

三、操作提示

1．为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、枪头和蒸馏水等在使用前必须进行处理。

2．缓冲液和酶应分装成小份，并在储存。使用前将所需试剂从冰箱拿出，放在融化。

3．在向微量离心管中添加反应组分时，每吸取一种试剂后，移液器上的。

4．在进行操作时，一定要戴好一次性手套。

【合作探究】

1.电泳是什么？DNA分子在凝胶中的迁移速率受到什么因素的影响？

2.你是否成功扩增出DNA片段？判断的依据是什么？

3.你进行电泳鉴定的结果是几条条带？如果不止一条条带，请分析产生这个结果的可能原因。

什么是引物？1个目的基因在第3次扩增时，需要几种引物？需要几个引物？

【任务探究】

任务一：通过填空简单回顾基因工程的基本操作程序知识框架，找出哪些地方需要PCR技术的应用。

任务二：阐明PCR的概念、原理及作用

一、什么是PCR？（概念）

问题1.PCR的全称是什么？PCR的原理是什么？

问题2.PCR的优点是什么？

二、PCR的实验过程

问题1.PCR的离心管里要放入哪些组分？这些组分分别有哪些功能？（重点：引物的作用）

问题2.PCR的过程分为几个步骤？每个步骤的条件和作用分别是什么？

任务三：找不同，罗列DNA与PCR的技术区别

完成下表，体内DNA复制与PCR的技术区别

项目

体内复制

PCR技术

解旋

引物

能量

酶

温度

复制特点

复制方向

任务四：PCR知识延伸

分组讨论，展示并讲解问题1和问题2

问题1.PCR技术中的数量关系：

物质(复制)

1次

2次

3次

n次

DNA分子数

含引物的DNA分子数

含引物A(或B)的DNA分子数

同时含引物A、B的DNA分子数

共消耗的引物(A和B)数量

问题2.一般情况下，一个DNA在PCR仪器中循环几次之后才能合成出两条脱氧核苷酸链等长的子代DNA？PCR循环n此后，共