DNA的生物合成近年原文.ppt

顺着解链方向生成的子链，复制是连续进行的，这股链称为领头链（leadingstrand）。另一股链因为复制的方向与解链方向相反，不能顺着解链方向连续延长，这股不连续复制的链称为随从链（laggingstrand）。复制中的不连续片段称为岡崎片段(okazakifragment)。领头链连续复制而随从链不连续复制，就是复制的半不连续性(semi-discontinuousReplication)。DNA复制的酶学和拓朴学变化TheEnzymologyandTopologyofDNAReplication第二节参与DNA复制的物质参与DNA复制的物质底物dNTP聚合酶DNA-pol模板解成单链的DNA母链引物与模板互补的RNA片段其它酶和蛋白质因子底物(substrate):dATP,dGTP,dCTP,dTTP聚合酶(polymerase):依赖DNA的DNA聚合酶简写为DNA-pol模板(template):解开成单链的DNA母链引物(primer):提供3?-OH末端使dNTP可以依次聚合解螺旋酶引物酶单链DNA结合蛋白DNA连接酶等复制的基本化学反应特点：需要引物和模板；新链的延长5?→3?方向PPiHOPPPG5′端3′端CGA聚合反应机理一、DNA聚合酶催化脱氧核苷酸之间聚合全称：依赖DNA的DNA聚合酶(DNA-dependentDNApolymerase)(DNA-directedDNApolymerase)缩写：DNA-pol活性：1.5??3?的聚合活性2.核酸外切酶活性DNA聚合酶接切1959年获诺贝尔生理学或医学奖奥乔亚科恩伯格SeveroOchoaArthurKornberg（一）原核生物有3种DNA聚合酶２个核心酶1个?-复合物（?、?、??、?、?、?6种亚基）1对?-亚基（可滑动的DNA夹子）DNA聚合酶Ⅲ全酶结构全酶结构包括：?亚基（130000）主要功能是合成DNA?亚基具有3??5?外切酶活性（复制保真性所必需）?亚基可增强其活性?亚基可能起组装作用核心酶由?、?和?亚基组成：两侧的β亚基发挥夹稳DNA模板链，并使酶沿模板滑动的作用2个?-亚基分别和1个核心酶相互作用，其柔性连接区可以确保在复制叉1个全酶分子的2个核心酶能够相对独立运动，分别负责合成前导链和后随链。功能：有促进全酶组装至模板上及增强核心酶活性的作用?-复合物由6种亚基组成：?、?、??、?、?、?小片段大片段/Klenow片段N端C端木瓜蛋白酶Klenow片段是实验室合成DNA，进行分子生物学研究中常用的工具酶。聚合酶NC小片段大片段（Klenow片段）3—5外切酶5—3外切酶DNA-polⅠ（109kD）DNA-polⅡ（120kD）DNA-polII基因发生突变，细菌依然能存活。DNA-polⅡ对模板的特异性不高，即使在已发生损伤的DNA模板上，它也能催化核苷酸聚合。因此认为，它参与DNA损伤的应急状态修复。真核生物和原核生物DNA聚合酶的比较E.Coli真核细胞功能Ⅰ填补复制中的DNA空隙，DNA修复和重组Ⅱ复制中的校对，DNA修复?DNA修复?线粒体DNA合成Ⅲ?错配修复?引物酶?前导链和后随链合成，错配修复2.酶在复制延长时对碱基的选择功能1.遵守严格的碱基配对规律3.复制出错时酶的及时校读功能DNA复制的保真性至少要依赖三种机制二、DNA聚合酶的碱基选择和校对功能实现复制的保真性三、复制中的解链伴有DNA分子拓扑学变化DNA分子的碱基埋在双螺旋内部，只有把DNA解成单链后，它才能起模板作用。理顺DNA链拓扑异构酶(gyrA,B)稳定已解开的单链单链DNA结合蛋白SSB催化RNA引物生成引物酶DnaG(dnaG)运送和协同DnaBDnaC(dnaC)解开DNA双链解螺旋酶DnaB(dnaB)辨认起始点DnaA(dnaA)蛋白质（基因）通用名功能原核生物复制起始的相关蛋白质（一）多种酶参与DNA解链和稳定单链状态——利用ATP供能，在复制叉前解开一小段DNA1.解螺旋酶(he