鼻咽癌肿瘤的抗原研究论文(共2篇) .pdfVIP

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鼻咽癌肿瘤的抗原研究论文（共2篇）

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如意！

第1篇：探讨阻断mTOR信号通路抑制鼻咽癌肿

瘤干细胞的作用机制

目前，越来越多的证据显示肿瘤干细胞（，CSCs)

会导致肿瘤复发和转移以及对放化疗不敏感，因此针

对肿瘤干细胞的治疗是成功治愈肿瘤的关键。我们的

前期研究发现在人原代鼻咽癌细胞中也存在类肿瘤干

细胞，同时mTOR信号通路呈激活状态，用免疫组织

化学双染技术证实这些异常活化的细胞中上皮干细胞

标记物可选择性的共表达，并且用雷帕霉素可抑制鼻

咽癌肿瘤细胞的增殖〔-2〕。因此我们可以假设鼻咽癌

类肿瘤干细胞中雷帕霉素耙蛋白（mTOR)通路较鼻咽

癌细胞异常激活，雷帕霉素可以通过下调mTOR信号

通路下游活性蛋白的表达而抑制鼻咽癌类肿瘤干细胞

的增殖。本研究采用无血清培养法富集类肿瘤干细胞，

并鉴定其干细胞特性，验证mTOR信号通路在类肿瘤

干细胞及鼻咽癌细胞中的表达差异，并观察雷帕霉素

在抗类肿瘤干细胞中的作用，初步探讨阻断mTOR信

号通路抑制鼻咽癌肿瘤干细胞的作用机制。

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1材料与方法

材料细胞鼻咽癌细胞株CNE2由南方医科大学肿

瘤研究所惠赠。

主要试剂胎牛血清、RPMI-1640培养液、培养液、

B27C1：50)、均购自GIBCO公司，EGF、bFGF购自

公司，mTOR、P-mTOR、P70S6、P-P70S6、4EBP1、、

CD44、SOX2购自Cellsignaling公司，OCT4、

Ramapycin购自Sigma公司，GAPDH购自公司，HRP

标记的二抗为Biosharp公司，CCK8购自Dojindo公

司。

主要试剂配制①含血清培养液：培养液45ml加胎

牛血清5ml加青霉素100U/ml加链霉素100g/L，摇匀，

冷藏备用；②无血清培养液：培养液49ml力口bFGF20

啤/L力口EGF力卩B271ml摇匀，冷藏备用。

实验方法细胞的普通培养复苏CNE2鼻咽癌细胞

于含血清培养液中，37°C、5%CO2培养箱培养，至细

胞处于对数生长期时，%胰蛋白酶消化、传代。

鼻咽癌细胞类肿瘤干细胞的无血清富集培养取对

数生长期普通培养之CNE2细胞，胰蛋白酶消化完全

离心后，PBS洗涤2次，加入无血清培养液，调整细

胞密度1X108/L于6孔板中，振荡，5%CO2、37°C

饱和湿度培养。2d后半量换液，悬浮培养第5天后低

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数离心细胞悬液收集肿瘤球细胞。

鼻咽癌肿瘤球细胞的干细胞特性鉴定及mTOR信

号通路的变化①CCK8法检测细胞增殖。将无血清培

养收集的CNE2肿瘤球细胞及将对数生长期的贴壁

CNE2细胞分别接种到96孔板中，每种细胞种6孔，

每孔5000个细胞，每孔中加含10%胎牛血清的

RPMI-1640培养液，37°C，5%CO2培养箱中培养。分

别在培养的第1、3、5、7天向每孔加入10ul的CCK8

溶液，继续孵育1h，用自动酶标仪（450nm波长）测

吸收度数值，绘制2组细胞的生长曲线。

检测干细胞标记物蛋白和mTOR及其信号通路下

游相关蛋白的表达。