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狂犬病毒G基因主要抗原表位区(Rmg)的表达及纯化
周松峰;廖文军;袁书智;覃绍敏;白安斌;吴健敏;陆芹章
【摘要】[目的]对狂犬病毒Rmg因进行克隆、表达、纯化及复性,以期获得表达量
高、反应原性好的Rmg蛋白,为研制快速、直观、简便检测狂犬病毒抗体的胶体金
试纸条奠定基础.[方法]用常规PCR从狂犬病毒基因组中克隆出狂犬病毒G蛋白的
主要抗原表位基因Rmg,并将其插入原核表达载体pET-Trx中,构建原核表达质粒
pET-Trx-Rmg,将pETTrx-Rmg转化BL21(DE3)plysS,在IPTG诱导下进行表
达.[结果]SDS分析结果表明,Rmg基因在BL21(DE3)plysS中获得高效表达,
表达量占菌体总蛋白的30.5％左右,并主要以不溶的包涵体形式存在,分子量约为
51.7kDa.将表达的蛋白以亲和层析法进行纯化并通过谷胱甘肽还原法进行复性,纯
化后蛋白纯度达99.1％.经Westernblotting检测,发现表达的Rmg蛋白能够与
狂犬病毒高免血清发生特异反应,但与犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CDV)阳性血
清不发生反应.[结论]Rmg蛋白具有良好的抗原性,可用于研制检测狂犬病毒抗体的
胶体金试纸条.%[Objective]Thepresentstudywasaimedtoclone,purify,
expressthemainantigenepitopegeneRmgandtoobtainhighly
expressedandreactiveRmgproteininordertodevelopcollaurumtest
paperforquick,directandconvenientdetectionofrabiesvirus.
[Method]ThemainantigenepitopeRmggenewasclonedfromrallies
virusgenomeusingRT-PCRandinsertedintotheprokaryoticexpression
vectorpET-TrxtoconstructrecombinantplasmidpET-Trx-Rmgandits
transformationintocompetentcellsBL21(DE3)plysS.Thetargetprotein
wasexpressedwithIPTGinductionandidentifiedonSDS.
[Result]TheRmggeneshowedhighexpressionofproteininBL21
(DE3)plysSaccountingforabout30.5%ofbacterialtotalproteinand
presentedasinclusionbodieswith51.7kDofweight.Thepurityof
expressedproteinreached99.1%followedbychromatographypurification
andglutathionerenaturation.Therewerenospecificreactionsof
expressedRmgproteinwithpositiveserumofCPVorCDV,whileitshowed
specificreactionwithRVinWesternblotting.[Conclusion]Itwassuggested
thatRmgproteinhasgoodantigenicityandcanbeusedfordeveloping
collaurumtestpaperfordetectionofrabiesvirus.
【期刊名称】《南方农业学报》
【年(卷),期】2011(042)010
【总页数】4页(P1276-1279)
【关键词】狂犬病病毒;Rmg基因;原核表达;纯化
【作者】周松峰;廖文军;袁书智;覃绍敏;白安斌;吴健敏;陆芹章
【作者单位】广西兽医研究所,南宁530001;广西
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