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研究肿瘤细胞耐药

3.1.耐药细胞株的建立

本实验以紫杉醇为诱导药，以人食管鳞癌细胞系EC109为诱导对象，采用高剂

量间歇诱导结合时间递增的方法建立耐药细胞株。终浓度为0.625μg/ml的紫

杉醇（此浓度是紫杉醇对EC109细胞IC50的12.5倍）作用于对数生长期的

EC109两个小时，之后弃含药培养基，用4℃PBS洗三次，0.25%胰蛋白酶消

化处理，800r/min离心4min收集细胞，加培养基重悬，重新接种于培养瓶继

续培养；24小时后可见大量细胞死亡，不断去除凋亡细胞，扩增活细胞，至生

长状态良好，达到70%~80%饱和时，传代培养3代；重复上述操作两次，即

EC109细胞在此阶段共被药物作用3次，得到细胞EC109/Taxol。MTT实验

测定亲本细胞与耐药细胞对多种细胞毒类化合物的敏感性。

3.2.裸鼠移植瘤耐药模型的建立

无菌条件下收集亲本株EC109和耐药株EC109/Taxol细胞，用无菌生理盐

水稀释至5×10个/ml，采用皮下移植方法，分别接种EC109和EC109/Taxol

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细胞于裸鼠右侧腋窝皮下，每只接种1×10个细胞。待其成瘤后（直径达1cm)

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即认为此瘤块为肿瘤，记录两细胞成瘤时间及成瘤率。