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GST-HDAC4融合蛋白载体的构建及其蛋白表达

邵阳光;刘姣;李丰

【摘要】ObjectiveToconstructtheprokaryoticexpressionvectorof

humanHDAC4proteinandglutathione-S-transferase(GST)forprotein

expressionandpurification.MethodspcDNA3.1-HDAC4wasdigestedby

EcoRI,thehHDAC4codingsequencewasobtainedandclonedinto

prokaryoticexpressionvectorpGEX-5X-1togeneratenovelvectorGST-

HDAC4.AfteridentificationofGST-HDAC4,EscherichiacoliBL21was

transformedandinducedbyisopropyl-β-D-thiogalactoside(IPTG),and

targetproteinwasobtainedafterpurification.Theexpressionofthe

recombinantplasmidwasprovedbyWesternblot.ResultsRestriction

enzymedigestionandsequencingindicatedthatprokaryoticexpression

vectorofGST-HDAC4fusionproteinwassuccessfullyconstructed.

CoomassiebrilliantbluestainingandWesternblotrevealedthatGST-

HDAC4fusionproteinwithbioactivitywassuccessfullyobtained.

ConclusionTheprokaryoticexpressionvectorofHDAC4wassuccessfully

constructed.ThefusionproteinofGST-HDAC4withbioactivityhasbeen

obtained.%目的构建人HDAC4蛋白与谷胱甘肽转移酶(GST)重组的融合蛋白原

核表达载体并进行表达和纯化.方法用EcoRI单酶切pcDNA3.1-HDAC4质粒,得

到hHDAC4全长编码序列,并将其克隆至原核表达载体pGEX-5X-1构建成新载体

GST-HDAC4,经鉴定完全正确后转化大肠埃希菌BL21,通过异丙基硫代-β-D半乳

糖苷(IPTG)诱导表达,并纯化获得目的蛋白.Westernblot检测重组质粒的表达.结

果酶切鉴定和测序结果显示,GST-HDAC4融合蛋白原核表达载体构建成功.考马斯

亮蓝染色和Westernblot结果显示,成功获得有生物活性的GST-HDAC4融合蛋

白.结论成功构建了HDAC4原核表达载体,获得有生物活性的GST-HDAC4蛋白.

【期刊名称】《中国医科大学学报》

【年(卷),期】2013(042)002

【总页数】3页(P149-151)

【关键词】GST-HDAC4;原核表达;融合蛋白

【作者】邵阳光;刘姣;李丰

【作者单位】中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室,教育部医学细胞生物学

重点实验室,沈阳110001

【正文语种】中文

【中图分类】Q257

组蛋白去乙酰化酶（histonedeacetylases，HDACs）是真核细胞中的一类重要蛋

白酶，参与染色质的结构修饰和基因表达调控，在肿瘤的发生和发展中起重要作用

［1］。通过组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histonedeacetylaseinhibitors，

HDACis）抑制HDACs的作用可使癌细胞凋亡，肿瘤生长状态改变［2］。目前，

HDACs