新孢子虫SAG1-SRS2融合基因真核表达质粒的构建及表达 .pdfVIP

维普资讯

中国兽医杂志２００７年（第４３卷）第】２期３

新孢子虫ＳＡＧ１一ＳＲＳ２融合基因真核

表达质粒的构建及表达

卢计委，刘群，汪明

（中国农业大学动物医学院，北京海淀１０００９４）

摘要：根据犬新孢子虫ＮｃＳＡＧ卜ＮｃＳＲＳ２融合基因序列，设计了１对含有Ｋｏｚａｋ序列、终止密码子、ＢａｍＨＩ和Ｘ＾０Ｉ酶

切位点的引物，以含有ＮｃＳＡＧ卜ＮｃＳＲｓ２融合基因的质粒ｐＧＥＸ—ｔＮｃＰ４３一Ｐ３６为模板，经ＰＣＲ扩增获得ＮｃＳＡＧ１一ＮｃＳＲＳ２融

合基因片段，用ＢａｍＨＩ和ＸｈｏＩ双酶切该片段，回收得到含有以上２个酶切位点黏端的ＮｃＳＡＧ１一ＮｃＳＲＳ２融合基因，将此

基因片段克隆至相同酶切回收后的ｐｃＤＮＡ３．１（＋）真核表达载体中，获得重组质粒ｐｃＮＣＳＡＧ１一ＳＲＳ２。经ＰＣＲ鉴定、限制性

内切酶酶切分析和克隆片段序列测定、比较，证实了重组质粒的正确性。将构建好的真核表达质粒转染到ｃＯＳ－７细胞中进行

瞬时表达，经免疫荧光检测，证实了该载体能在细胞内进行蛋白表达。

关键词：犬新孢子虫；ＮｃＳＡＧ１一ＳＲＳ２融合基因；真核表达；转染

中图分类号：Ｑ７８６文献标识码：Ａ文章编号：０５２９—６００５（２００７）１２－０００３—０３

Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆａｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒａｎｄｉｔｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆ

ＮｃＳＡＧ１一ＮｃＳＲＳ２ｆｕｓｉｏｎｇｅｎｅｏｆＮｅｏｓｐｏｒａｃａｎｉｎｕｍ

ＬＵｊｉ—ｗｅｉ。ＬＩＵＱｕｎ。ＷＡＮＧＭｉｎｇ

（ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＣｈｉｎａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００９４，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅｗｈｏｌｅｓｅｇｍｅｎｔｏｆＮｃＳＡＧ１一ＮｃＳＲＳ２ｆｕｓｉｏｎｇｅｎｅｗａｓａｍｐｌｉｆｉｅｄｂｙＰＣＲｆｒｏｍｐｌａｓｍｉｄ

ｐＧＥＸ—ｔＮｃＰ４３一Ｐ３６．ＴｈｅＰＣＲｐｒｏｄｕｃｔｗａｓｄｉｇｅｓｔｅｄｗｉｔｈＢａｍＨＩａｎｄＸｈｏＩ，ｔｈｅｎｉｎｓｅｒｔｅｄｉｎｔｏｐｃＤＮＡ３．１

（＋）ｂｅｔｗｅｅｎＢａｍＨＩａｎｄＸ＾０ＩｓｉｔｅｓｔｏｇｅｎｅｒａｔｅａｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｌａｓｍｉｄｐｃＮＣＳＡＧ１一ＳＲＳ２，ａｎｄｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ

ｉｎｔｏＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＤＨ５ｄ．Ｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｃｏｌｏｎｉｅｓｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｙｔｈｅｍｅｔｈｏｄｓｏｆｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｅｎｚｙｍｅ

ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ，ＰＣＲａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．ＴｈｅｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｌａｓｍｉｄｐｃＮＣＳＡＧ１一ＳＲＳ２ｗｅｒｅｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ

ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅＮｃＳＡＧ１一ＮｃＳＲＳ２ｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｂｖＣＯＳ一７ｃｅｌｌｓｆｏｌｌｏｗｉｎｇｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ

ｗｉｔｈｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｌａｓｍｉｄｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｉｍｍｕｎｏｓｔａｉｎｉｎｇｗｉｔｈａｎｔ—Ｎｉｅｏｓｐｏｒａｃａｎｉｎｕｍ—ｂｏｄｉｅｓ．

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｎｅｏｓｐｏｒａｃａｎｉｎｕｍ；ＮｃＳＡＧ１～ＮｃＳＲＳ２ｆｕｓｉｏｎｇｅｎｅ；ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ；ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ

Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＬＩＵＱｕｎ

犬新孢子虫（Ｎｅｏｓｐｏｒａｃａｎｉｎｕｍ），可引起奶牛