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微生物限度检查方法适用性试验方案

验证方案组织与实施

微生物限度检查方法适用性试验工作应由质量管理部门负责组织，质量管理部门有关人员组成验证小组,参与实施。

方案起草

部门／职务

签名

日期

质量管理部QC

方案审核

部门／职务

签名

日期

质量管理部ＱC经理

方案批准

部门／职务

批准人

批准日期

质量管理部质量总监

目录

概述

验证目得与风险评估

验证内容

四、方法判定

五、再验证周期

六、参考文献

七、结果评价及结论

1、概述：

微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度得方法.检查项目包括需氧菌数、霉菌数与酵母菌数及控制菌检查.当建立产品得微生物限度检查法时，应进行需氧菌、霉菌与酵母菌计数方法得适用性试验与控制菌检查方法得适用性试验,以确认所采用得方法适合于该产品得需氧菌、霉菌与酵母菌数得测定与控制菌检查。

依照中国药典2015版，需氧菌、霉菌与酵母菌及控制菌均采用平皿法进行方法适用性试验.

２、试验目得与风险评估：

验证目得：确认所采用得需氧菌、霉菌与酵母菌计数方法及控制菌检查方法适合我公司所生产产品得微生物限度检查.

风险评估：

项目

潜在失效模式

失效影响

采取措施

未按方案执行

试验部分项目出现偏差与漂移

直接影响试验结果得

正确性

严格执行经批准

得试验方案

试验过程操作不当

未达到试验标准

试验失败

未严格遵循试验方案规定

3、验证内容：

3、1、培养基来源：

品名

批号

规格

来源

确认人:确认日期：

３、2、检查用培养基配制方法:

培养基名称

配制方法

ＰH7、0氯化钠—蛋白胨缓冲液

取本品１４、63g,加水10０0ml，加热溶解，分装,1２１℃，15分钟灭菌，备用。

胰酪大豆胨琼脂培养基

取本品４0g，加水10００ml，加热溶解，分装，12１℃,1５分钟灭菌，备用。

胰酪大豆胨液体培养基

取本品3０、0ｇ，加水100０ml，加热溶解,分装,121℃，１５分钟灭菌，备用。

沙氏葡萄糖液体培养基

取本品３0、０ｇ,加水1０00ml，加热溶解,分装，１２1℃，１5分钟灭菌,备用。

沙氏葡萄糖琼脂培养基

取本品65、0g，加水１０00mｌ,加热溶解，分装，１2１℃，1５分钟灭菌，备用。

麦康凯琼脂培养基

取本品5０、０ｇ，加水1000ml，加热溶解,分装,121℃，１5分钟灭菌，备用.

麦康凯液体培养基

取本品35、０，加水１00０ml，加热溶解,分装，１21℃，15分钟灭菌，备用.

确认人：确认日期：

３、3、使用仪器

名称

型号

校验单位

有效期至

数显电热恒温培养箱

数显霉菌培养箱

确认人：确认日期:

３、4、验证试验用菌种：

菌种名称

代号

传代代数

来源

金黄色葡萄球菌

大肠埃希菌

铜绿假单胞菌

枯草芽孢杆菌

白色念珠菌

黑曲霉菌

确认人：确认日期：

3、5试验方法：

取供试品10ｍl加ＰＨ7、0氯化钠-蛋白胨缓冲液至10０mｌ→１：１0供试液。需氧菌、霉菌与酵母菌、控制菌采用常规法。

3、６菌液得制备:

３、6、1取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌得胰酪大豆胨琼脂斜面培物一铂金饵,加入胰酪大豆胨液体培养基中置30～3５℃培养箱中培养18～24h，取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌得胰酪大豆胨液体培养物1ｍl加入9mｌ０、9％无菌氯化钠溶液中，制成10—1得菌液，依法1０倍稀释至10～７,分取各菌悬液1ｍl注入平皿中,立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基20ｍl,各菌悬液平行制备两个平皿，平皿法培养计数，取小于1０0CFＵ/mｌ与１000CFU/ml得菌液备用.

３、６、2取白色念珠菌得沙氏葡萄糖琼脂斜面培养物,加入沙氏葡萄糖液体培养基中置２０～2５℃培养箱中培养２4～48h，取白色念珠菌得沙氏葡萄糖液体培养物1ml加入９ml０、9%无菌氯化钠溶液中,制成１０－1得菌液，依法10倍稀释至10~7,取菌悬液１mｌ注入平皿中,立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基25ml,各菌悬液平行制备两个平皿，平皿法培养计数，取小于100ＣFU／ml与1000CFU/ｍｌ得菌液备用。

3、６、3取黑曲霉得新鲜培养物接种子沙氏葡萄糖琼脂斜面上,20—25℃培养5－７天,加入3－5ml含0、05％聚山梨酯8０得0、9％无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱。取1ml加入含0、0５％聚山梨酯８0得9ml0、9％无菌氯化钠溶液中，制成１０—1得菌液,依法10倍稀释至1０～７，取,取菌悬液1ml注入平皿中，立